フェロポーチン抗体およびその使用方法

专利摘要:
鉄ホメオスタシスの障害を治療するための組成物を提供する。さらに具体的には、抗フェロポーチン抗体、かかる抗体を含有する組成物、対応する核酸、ベクターおよび宿主細胞、ならびにかかる抗体を作製する方法を提供する。
公开号:JP2011510629A
申请号:JP2010544443
申请日:2009-01-23
公开日:2011-04-07
发明作者:アーベツドソン，タラ；サス，バーブラ；デイアス，グレゴリー；ロツトマン，ジエームズ
申请人:アムジエン・インコーポレーテツド；
IPC主号:C12N15-09

专利说明:

[0001] （関連特許出願に対する相互参照）
本出願は、２００８年１２月１１日に出願された米国仮出願第６１／１２１，７２９号の優先権、および２００８年１月２５日に出願された米国仮出願第６１／０２３，６９３号の優先権を主張する。各優先出願の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。]
[0002] （発明の分野）
本発明は、フェロポーチン抗体およびその使用に関する。]
背景技術

[0003] （背景）
鉄はすべての生命体の成長および発達のために必要となる、必須微量元素である。哺乳動物の鉄含有量は、鉄吸収、鉄循環、および鉄を貯蔵する細胞からの鉄放出を制御することによって、調節される。鉄放出は、血漿に鉄を放出することが可能な主細胞である、腸細胞、マクロファージおよび肝細胞の細胞表面上に位置する主要な鉄輸出タンパク質であるフェロポーチンによって制御される。ＭＴＰ１またはフェロポーチン−１としても知られているフェロポーチンは、細胞内鉄排出を媒介する複数回貫通型膜タンパク質である（Ｄｏｎｏｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４０３：７７６−７８１，２０００、Ａｂｂｏｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７５：１９９０６−１９９１２，２０００）。フェロポーチンは、十二指腸の腸細胞および細網内皮系のマクロファージに高度に発現し、食事からの鉄の輸送および老化赤血球からの循環利用にそれぞれ関与する（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：３９７８６−３９７９１，２００２）。フェロポーチンは、鉄調整ホルモンであるヘプシジンによって負に調整される。ヘプシジンは、フェロポーチンに結合し、フェロポーチンの内部移行および分解をもたらすことが示されている（Ｎｅｍｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０７：３２８−３３３，２００６；Ｎｅｍｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０６：２０９０−２０９３，２００４；ｄｅ Ｄｏｍｅｎｉｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．，８：２５６９−２５７８，２００７）。この機序は、マクロファージ、肝細胞および腸細胞からの鉄の放出を遮断する（Ｋｎｕｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：１３２４−１３２８，２００８、Ｎｅｍｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０７：３２８−３３３，２００６、Ｋｎｕｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０２：４１９１−４１９７，２００３）。]
[0004] フェロポーチンは、トランスジェニックマウスにおいて示されるように、鉄排出に重要である、つまり、フェロポーチンの喪失は、胎児期に致死的である一方で、条件付ノックアウトによるフェロポーチンの不活性化は、腸細胞、マクロファージおよび肝細胞において鉄貯蔵の増加をもたらす（Ｄｏｎｏｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｅｔａｂ．，１：１９１−２００，２００５）。Ｔｈｏｍａｓ ａｎｄ Ｏａｔｅｓ，Ｇｕｔ，２００４；５３；４４−４９は、ラットフェロポーチンペプチド配列Ｇｅｎｂａｎｋアクセション番号ＡＡＫ７７８５８（膜貫通ドメイン３および４の間にあることが予測される）を用いて生成されるポリクローナル抗体が、細胞内の鉄取り込みを減少させたが、鉄放出に影響を及ぼさなかったことを報告した。]
先行技術

[0005] Ｄｏｎｏｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４０３：７７６−７８１，２０００
Ａｂｂｏｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７５：１９９０６−１９９１２，２０００
Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：３９７８６−３９７９１，２００２
Ｎｅｍｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０７：３２８−３３３，２００６
Ｎｅｍｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ， ３０６：２０９０−２０９３，２００４
ｄｅ Ｄｏｍｅｎｉｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．，８：２５６９−２５７８，２００７
Ｋｎｕｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：１３２４−１３２８，２００８
Ｋｎｕｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０２：４１９１−４１９７，２００３]
[0006] （発明の要旨）
本発明の種々の実施形態は、以下に記載されるように、ヒトフェロポーチンに結合するモノクローナル抗体を含む抗体、かかる抗体を産生する方法、フェロポーチンを検出するためにかかる抗体を使用する方法、かかる抗体を含む医薬製剤、該医薬製剤を調製する方法、ならびに赤血球生成刺激剤および／または鉄キレート剤との併用療法を含む、該医薬製剤により患者を治療する方法を提供する。かかる抗体をコードする核酸、かかる核酸を含むベクターおよび組換え宿主細胞、ならびにかかる抗体を産生する方法も提供する。]
[0007] 一態様において、該抗体は、例えば、所望の親和性を有する、フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離されたモノクローナル抗体といった、抗体である。いくつかの実施形態において、フェロポーチンを発現する細胞に対する抗体の親和性の解離定数（ｋｄ）は、約１０−６Ｍ以下、または約１０−７Ｍ以下、または約１０−８Ｍ以下、または約１０−９Ｍ以下である。いくつかの実施形態において、フェロポーチンの細胞外ドメインは、配列番号１６のアミノ酸４６〜６０、１１６〜１２６、２０４〜２０５、３２５〜３４２、３９４〜４４９、５１３〜５１７、３５〜５７、１１６〜１２４、３３２〜３４０、３９３〜４４９および５１５〜５１８、ならびに少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２アミノ酸長さのそのフラグメントからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、フェロポーチンの内部移行および／または分解を阻害する。いくつかの実施形態において、抗体は、フェロポーチンのヘプシジン媒介による内部移行または分解を阻害する。一実施形態において、抗体は、約１０−６Ｍ以下、または約１０−７Ｍ以下、または約１０−８Ｍ以下、または約１０−９Ｍ以下のＥＣ５０で、細胞内鉄濃度を低下させる、および／または血中鉄濃度を増加させる。他の実施形態において、抗体は、哺乳動物における、赤血球数（数値）またはヘモグロビンもしくはヘマトクリットレベルを増加させる、ならびに／または網状赤血球数、網状赤血球平均細胞体積および／もしくは網状赤血球ヘモグロビン含有量を正常化する特性を示す。]
[0008] 種々の実施形態において、抗体は、配列番号１６のアミノ酸３９３〜４４９内に位置する少なくとも５つ、１０、１５もしくはそれ以上のアミノ酸を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１６のアミノ酸４３９〜４４９内に位置する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれ以上のアミノ酸を含むフェロポーチンのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＡＮＩＶＰＥＴＳＰＥＳ（配列番号１６のアミノ酸４３９〜４４９）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。エピトープは、完全に該フラグメント内にあり得るか、または該フラグメントのエピトープは、フラグメント内の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つのアミノ酸およびフラグメント外の１つ以上のアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＮＩＶＰＥＴＳＰＥＳ（配列番号１６のアミノ酸４４０〜４４９）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＶＰＥＴＳＰＥＳＶ（配列番号１６のアミノ酸４４１〜４５０）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＶＰＥＴＳＰＥＳＶＰ（配列番号１６のアミノ酸４４２〜４５１）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＰＥＴＳＰＥＳＶＰＩ（配列番号１６のアミノ酸４４３〜４５２）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＴＳＰＥＳＶＰＩＩＳ（配列番号１６のアミノ酸４４５〜４５４）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＡＮＩＶＰＥＴＳＰ（配列番号１６のアミノ酸４３９〜４４７）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＶＰＥＴＳＰＥＳ（配列番号１６のアミノ酸４４１〜４４９）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＡＮＩＶＰＥＴＳ（配列番号１６のアミノ酸４３９〜４４６）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＶＰＥＴＳＰＥ（配列番号１６のアミノ酸４４１〜４４８）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＶＰＥＴＳＰ（配列番号１６のアミノ酸４４１〜４４７）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＰＥＴＳＰＥＳ（配列番号１６のアミノ酸４４３〜４４９）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＬＶＥＬＹＧＮＳＬＬ（配列番号１６のアミノ酸５０〜６９）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＦＬＶＥＬＹＧＮＳＬ（配列番号１６のアミノ酸４９〜６８）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＶＥＬＹＧＮＳＬＬＬ（配列番号１６のアミノ酸５１〜７０）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＥＬＹＧＮＳＬＬＬＴ（配列番号１６のアミノ酸５２〜７１）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＬＹＧＮＳＬＬＬＴＡ（配列番号１６のアミノ酸５３〜７２）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＬＡＦＬＹＭＴＶＬＧ（配列番号１６のアミノ酸３１４〜３２３）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＡＦＬＹＭＴＶＬＧＦ（配列番号１６のアミノ酸３１５〜３２４）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＦＬＹＭＴＶＬＧＦＤ（配列番号１６のアミノ酸３１６〜３２５）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＱＧＥＳＩＴＰＴＫＩＰＥＩＴ（配列番号１６のアミノ酸４１３〜４２７）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＱＧＥＳＩＴＰＴＫ（配列番号１６のアミノ酸４１３〜４２２）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＱＧＥＳＩＴＰＴＫＩ（配列番号１６のアミノ酸４１４〜４２３）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＧＥＳＩＴＰＴＫＩＰ（配列番号１６のアミノ酸４１５〜４２４）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＥＳＩＴＰＴＫＩＰＥ（配列番号１６のアミノ酸４１６〜４２５）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＳＩＴＰＴＫＩＰＥＩ（配列番号１６のアミノ酸４１７〜４２６）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＴＰＴＫＩＰＥＩＴ（配列番号１６のアミノ酸４１８〜４２７）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＤＧＷＶＳＹＹＮＱＰ（配列番号１６のアミノ酸２９７〜３０６）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＴＴＥＩＹＭＳＮＧＳＮＳ（配列番号１６のアミノ酸４２６〜４３８）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＴＥＩＹＭＳＮＧＳＮＳＡ（配列番号１６のアミノ酸４２８〜４３９）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＴＴＥＩＹＭＳＮＧ（配列番号１６のアミノ酸４２６〜４３５）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＴＴＥＩＹＭＳＮＧＳ（配列番号１６のアミノ酸４２７〜４３６）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＴＥＩＹＭＳＮＧＳＮ（配列番号１６のアミノ酸４２８〜４３７）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＥＩＹＭＳＮＧＳＮＳ（配列番号１６のアミノ酸４２９〜４３８）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＹＭＳＮＧＳＮＳＡ（配列番号１６のアミノ酸４３０〜４３９）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＹＨＧＷＶＬＴＳＣＹ（配列番号１６のアミノ酸１２４〜１３３）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＲＤＧＷＶＳＹＹＮＱ（配列番号１６のアミノ酸２９６〜３０５）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＥＩＹＭＳＮＧ（配列番号１６のアミノ酸４２９〜４３５）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＹＭＳＮＧＳＮ（配列番号１６のアミノ酸４３０〜４３７）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸ＩＴＰＴＫ（配列番号１６のアミノ酸４１８〜４２２）を含むフェロポーチンのフラグメント、または本フラグメント内の、もしくは本フラグメントのエピトープに結合する。]
[0009] 種々の実施形態において、モノクローナル抗体は、抗体３１Ａ５、３７Ａ２、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ａ４、３８Ｃ８、３８Ｄ２、３８Ｅ３および３８Ｇ６のうちのいずれか、またはかかる抗体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２もしくはＣＤＲＬ３のうちのいずれか１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つを保有する抗体を含み得、任意に、かかる単数もしくは複数のＣＤＲにおいて１つもしくは２つの変異体、またはかかる抗体のうちのいずれかの軽鎖もしくは重鎖可変領域を保有する抗体、またはかかる抗体のうちのいずれかのすべての重鎖ＣＤＲおよび／もしくはすべての軽鎖ＣＤＲを保有する抗体、または抗体３１Ａ５、３７Ａ２、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ａ４、３８Ｃ８、３８Ｄ２、３８Ｅ３および３８Ｇ６と同一のヒトフェロポーチン上のエピトープに結合する、もしくは少なくとも７５％ヒトフェロポーチンに結合するためにかかる抗体と競合する抗体を含む。]
[0010] 種々の実施形態はまた、本明細書に記載のモノクローナル抗体のうちのいずれかをコードする核酸、かかる核酸配列を含むベクター、およびかかる核酸またはベクターを含む宿主細胞も提供する。関連した態様において、抗体を産生するために核酸が発現されるように、前述の宿主細胞を培養するステップと、任意に、宿主細胞または培地から抗体を回収するステップを含む、かかるモノクローナル抗体の組換え産生のための方法を提供する。関連した実施形態において、前述の方法によって産生された単離される抗体または薬剤を提供する。かかる抗体は、任意に、追加の治療、細胞傷害性、または診断部分に共役される。]
[0011] いくつかの実施形態において、抗フェロポーチン抗体は、（ａ）哺乳動物に、フェロポーチン（配列番号１６）をコードする核酸を投与するステップと、任意に（ｂ）前記哺乳動物に、フェロポーチン（配列番号１６）をコードする同一または異なる核酸を投与するステップと、任意に（ｃ）前記哺乳動物に、フェロポーチンを発現する細胞膜を含む組成物を投与するステップと、（ｄ）前記哺乳動物から、抗体を発現する細胞を得るステップと、によって産生される。]
[0012] 別の態様において、試料において、ヒトフェロポーチンを検出する方法を提供し、ヒトフェロポーチンに抗体を結合させることが可能な条件下で、前述の抗体のいずれかと、ヒトからの試料を接触させるステップと、結合抗体を検出するステップと、を含む。一実施形態において、フェロポーチンに対する第１の抗体は、捕捉試薬として、固体支持体上で固定化され、フェロポーチンに対する第２の抗体は、検出試薬として使用される。関連した態様において、試料におけるフェロポーチンの量は、結合抗体の量を測定することによって、定量化される。]
[0013] 別の態様において、本明細書に記載の抗体のうちのいずれかの治療有効量、および薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。ヘプシジンレベルの上昇、ヘプシジン関連障害、または貧血が挙げられるが、これらに限定されない、鉄ホメオスタシスの障害に罹患するヒトの治療用の薬剤の調製における、かかる抗体の使用法も提供する。第２の治療剤と抗体の投与を含む同時投与方法は、本明細書に記載されるように、第２の治療剤との同時投与用の薬剤の調製における抗体の使用だけでなく、抗体との同時投与用の薬剤の調製における第２の治療剤の使用を包含することを理解されたい。]
[0014] 種々の実施形態は、例えば、治療有効量のかかる抗体を投与することによって、鉄ホメオスタシスの障害、ヘプシジン関連障害に罹患する哺乳動物、または貧血に罹患する哺乳動物を治療するための、かかる抗体を使用する方法をさらに含む。例示的な実施形態において、該哺乳動物は、アフリカ型鉄過剰症、αサラセミア、アルツハイマー病、貧血、癌性貧血、慢性疾患に伴う貧血、炎症性貧血、動脈硬化症またはアテローム性動脈硬化症（冠動脈疾患、脳血管疾患、または末梢閉塞性動脈疾患を含む）、失調症、鉄に関連した失調症、無トランスフェリン血症、癌、セルロプラスミン欠損症、化学療法誘導貧血、末期腎不全もしくは慢性腎疾患／腎不全を含む慢性腎疾患／腎臓病（ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶ）、肝臓の肝硬変、典型的なヘモクロマトーシス、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）、ヘプシジン過剰（ヘプシジンの上昇）を伴う状態、先天性赤血球異形成貧血、うっ血性心不全、クローン病、糖尿病、鉄の生体内分布の障害、鉄ホメオスタシスの障害、鉄代謝の障害、フェロポーチン病、フェロポーチン突然変異ヘモクロマトーシス、葉酸欠乏症、フリードライヒ失調症、索性脊髄症、ｇｒａｃｉｌｅ症候群、ヘリコバクター・ピロリ感染もしくは他の細菌感染、ハレルフォルデン・スパッツ病、ヘモクロマトーシス、トランスフェリン受容体２において突然変異から生じるヘモクロマトーシス、異常血色素症、肝炎、肝炎（Ｂｒｏｃｋ）、Ｃ型肝炎、肝細胞癌、遺伝性ヘモクロマトーシス、ＨＩＶもしくは他のウイルス性疾患、ハンチントン病、高フェリチン血症、低色素性小球性貧血、低鉄血症、インスリン抵抗性、鉄欠乏性貧血、鉄欠乏障害、鉄過剰障害、ヘプシジン過剰を伴う鉄欠乏状態、若年性ヘモクロマトーシス（ＨＦＥ２）、多発性硬化症、トランスフェリン受容体２、ＨＦＥ、ヘモジュベリン、フェロポーチンもしくは鉄代謝の他の遺伝子の突然変異、新生児ヘモクロマトーシス、鉄に関連した神経変性疾患、骨減少症、骨粗鬆症膵炎、パントテン酸キナーゼ関連神経変性症、パーキンソン病、ペラグラ、異食症、ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、偽脳炎、肺血鉄症、赤血球障害、関節リウマチ、変形性関節症、敗血症、鉄芽球性貧血、全身性エリテマトーデス、サラセミア、中間型サラセミア、輸血後鉄過剰症、腫瘍、血管炎、ビタミンＢ６欠乏症、ビタミンＢ１２欠乏症、ウィルソン病ならびに／または鉄過剰に関連した心疾患からなる群から選択される病態に罹患しているヒトである。]
[0015] さらに別の態様において、（ａ）前述の抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤、および（ｂ）赤血球生成刺激剤を治療有効量で投与することによって、鉄ホメオスタシスの障害に罹患する哺乳動物を治療するための方法を提供する。例示的な赤血球生成刺激剤には、エリスロポエチン、エリスロポエチンアゴニスト変異体、およびエリスロポエチン受容体に結合し、かつ活性化するペプチドまたは抗体が含まれる。赤血球生成刺激剤としては、エポエチンアルファ、エポエチンベータ、エポエチンデルタ、エポエチンオメガ、エポエチンイオタ、エポエチンゼータ、およびこれらの類似体、擬似ペプチド、擬似抗体およびＨＩＦ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない（米国特許公開第２００５／００２０４８７号を参照されたく、この開示は、参照によりその全体が組み込まれる）。特に、エリスロポエチンとしては、以下の特許または特許出願に開示される、エリスロポエチン、ならびにエリスロポエチン分子もしくは変異体もしくはこれらの類似体が挙げられるが、これらに限定されず、それらの特許または特許出願は、それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。米国特許第４，７０３，００８号、第５，４４１，８６８号、第５，５４７，９３３号、第５，６１８，６９８号、第５，６２１，０８０号、第５，７５６，３４９号、第５，７６７，０７８号、第５，７７３，５６９号、第５，９５５，４２２号、第５，８３０，８５１号、第５，８５６，２９８号、第５，９８６，０４７号、第６，０３０，０８６号、第６，３１０，０７８号、第６，３９１，６３３号、第６，５８３，２７２号、第６，５８６，３９８号、第６，９００，２９２号、第６，７５０，３６９号、第７，０３０，２２６号、第７，０８４，２４５号、第７，２１７，６８９号、ＰＣＴ公開番号第ＷＯ９１／０５８６７、ＷＯ９５／０５４６５、ＷＯ９９／６６０５４、ＷＯ００／２４８９３、ＷＯ０１／８１４０５、ＷＯ００／６１６３７、ＷＯ０１／３６４８９、ＷＯ０２／０１４３５６、ＷＯ０２／１９９６３、ＷＯ０２／２００３４、ＷＯ０２／４９６７３、ＷＯ０２／０８５９４０、ＷＯ０３／０２９２９１、ＷＯ２００３／０５５５２６、ＷＯ２００３／０８４４７７、ＷＯ２００３／０９４８５８、ＷＯ２００４／００２４１７、ＷＯ２００４／００２４２４、ＷＯ２００４／００９６２７、ＷＯ２００４／０２４７６１、ＷＯ２００４／０３３６５１、ＷＯ２００４／０３５６０３、ＷＯ２００４／０４３３８２、ＷＯ２００４／１０１６００、ＷＯ２００４／１０１６０６、ＷＯ２００４／１０１６１１、ＷＯ２００４／１０６３７３、ＷＯ２００４／０１８６６７、ＷＯ２００５／００１０２５、ＷＯ２００５／００１１３６、ＷＯ２００５／０２１５７９、ＷＯ２００５／０２５６０６、ＷＯ２００５／０３２４６０、ＷＯ２００５／０５１３２７、ＷＯ２００５／０６３８０８、ＷＯ２００５／０６３８０９、ＷＯ２００５／０７０４５１、ＷＯ２００５／０８１６８７、ＷＯ２００５／０８４７１１、ＷＯ２００５／１０３０７６、ＷＯ２００５／１００４０３、ＷＯ２００５／０９２３６９、ＷＯ２００６／５０９５９、ＷＯ２００６／０２６４６、ＷＯ２００６／２９０９４号、ならびに米国公開番号第ＵＳ２００２／０１５５９９８、ＵＳ２００３／００７７７５３、ＵＳ２００３／００８２７４９、ＵＳ２００３／０１４３２０２、ＵＳ２００４／０００９９０２、ＵＳ２００４／００７１６９４、ＵＳ２００４／００９１９６１、ＵＳ２００４／０１４３８５７、ＵＳ２００４／０１５７２９３、ＵＳ２００４／０１７５３７９、ＵＳ２００４／０１７５８２４、ＵＳ２００４／０２２９３１８、ＵＳ２００４／０２４８８１５、ＵＳ２００４／０２６６６９０、ＵＳ２００５／００１９９１４、ＵＳ２００５／００２６８３４、ＵＳ２００５／００９６４６１、ＵＳ２００５／０１０７２９７、ＵＳ２００５／０１０７５９１、ＵＳ２００５／０１２４０４５、ＵＳ２００５／０１２４５６４、ＵＳ２００５／０１３７３２９、ＵＳ２００５／０１４２６４２、ＵＳ２００５／０１４３２９２、ＵＳ２００５／０１５３８７９、ＵＳ２００５／０１５８８２２、ＵＳ２００５／０１５８８３２、ＵＳ２００５／０１７０４５７、ＵＳ２００５／０１８１３５９、ＵＳ２００５／０１８１４８２、ＵＳ２００５／０１９２２１１、ＵＳ２００５／０２０２５３８、ＵＳ２００５／０２２７２８９、ＵＳ２００５／０２４４４０９、ＵＳ２００６／００８８９０６号、および第ＵＳ２００６／０１１１２７９号。ある例示的な実施形態において、赤血球生成刺激剤は、ヒトエリスロポエチン（配列番号２１）およびダーベポエチンアルファ（配列番号２２）からなる群から選択される。かかる方法に従って治療され得る貧血の例示的な形態には、炎症性貧血、癌性貧血、化学療法誘導貧血、鉄欠乏性貧血、鉄ホメオスタシスの障害、フェロポーチン病、または腎臓病によって起こる貧血が含まれる。赤血球生成刺激剤による療法に対して、低応答性、または抵抗性でもある、貧血に罹患する哺乳動物を治療する方法も提供し、それには、治療有効量の抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤を投与するステップを含む。]
[0016] 別の関連した態様において、鉄ホメオスタシスの障害、またはヘプシジンレベルの上昇と関連した障害、またはヘプシジン関連障害、または鉄ホメオスタシスの障害、または貧血に罹患する哺乳動物を治療するためのキットも提供する。例示的な一実施形態において、該キットには、（ａ）抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤、および（ｂ）赤血球生成刺激剤、および任意に、鉄または鉄キレート剤が含まれる。別の例示的な実施形態において、該キットには、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤、容器に添付されているもしくは容器とともに包装されているラベルが含まれ、該ラベルは、赤血球生成刺激剤とともに、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤の使用を説明する。さらに別の例示的な実施形態において、該キットには、赤血球生成刺激剤および容器に添付されているもしくは容器とともに包装されているラベルが含まれ、該ラベルは、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤とともに、赤血球生成刺激剤の使用を説明する。赤血球生成刺激剤を伴う投与用の薬剤を調製する際の抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤の使用、ならびに抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤を伴う投与用の薬剤を調製する際の赤血球生成刺激剤の使用も提供する。これらのキットまたは使用のいずれにおいても、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤および赤血球生成刺激剤は、別個のバイアル中に入れることができる、または単一の医薬組成物に一緒にして混合することができる。さらに別の実施形態において、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤、赤血球生成刺激剤、または双方は、単一の医薬組成物に鉄または鉄キレート剤と一緒にして混合することができる、または別個のバイアルに入れることができる。]
[0017] 治療を必要とする対象のための治療計画を選択する方法も提供し、それには、（ａ）血中鉄レベルの減少またはヘプシジンレベルの上昇に対して対象をスクリーニングするステップと、（ｂ）前記対象に、前述の抗体のいずれかを処方するステップと、および任意に、前記対象に、赤血球生成刺激剤ならびに／または鉄および／もしくは鉄キレート剤を処方するステップと、を含む。いくつかの実施形態において、該スクリーニングには、生体試料を得るステップと、前記試料における、鉄レベルを決定するステップと、を含む。]
[0018] 種々の実施形態は、鉄ホメオスタシスの障害または鉄過剰の治療のための併用療法を提供する。いくつかの実施形態において、併用療法は、治療を必要とする対象に、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤および赤血球生成刺激剤を治療有効量で投与するステップを含む。いくつかの実施形態において、併用療法は、治療を必要とする対象に、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤および鉄を治療有効量で投与するステップを含む。いくつかの実施形態において、併用療法は、治療を必要とする、例えば、鉄過剰に罹患している対象に、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤および鉄キレート剤を治療有効量で投与するステップを含む。いくつかの実施形態において、併用療法は、治療を必要とする対象に、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤および抗ヘプシジン抗体を治療有効量で投与するステップを含む。いくつかの実施形態において、併用療法において、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤および他の薬剤は、１つの組成物に製剤化される。いくつかの実施形態において、併用療法において、抗フェロポーチン抗体または特異的結合剤および他の薬剤は、別個の組成物に製剤化される。]
[0019] 前述の要旨は、本発明のすべての態様を定義することを意図せず、追加の態様は、詳細な説明等の他の項に記載される。全文書は、統合された開示として関連されるべきであることを意図するものであり、特性の組み合わせが、本文書の同一の文、または段落、または項において、一緒に見出されない場合でさえ、本明細書に記載される特性のすべての組み合わせは、企図されることを理解するべきである。]
[0020] 前述に加えて、本発明は、追加の態様として、本明細書の特定の段落によって定義される変更例よりも何らかの点で範囲がさらに狭くなる、本発明のあらゆる実施形態を含むことができる。例えば、本発明のある態様は、一属として記載され、一属のすべての員は、単独で、本発明の一態様であり得る。また、一属として記載される、または一属の一員を選択する態様は、属の２つ以上の員の組み合わせを包含することを理解するべきである。]
[0021] 本明細書において、種々の実施形態が、種々の状況下で、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言語を用いて示される一方、関連した実施形態はまた、「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という言語を用いても説明され得ることを理解するべきである。「１つの」（「ａ」または「ａｎ」）という用語は、１つ以上のものを指し、例えば、「免疫グロブリン分子」が、１つ以上の免疫グロブリン分子を表すように理解されることに留意されたい。したがって、１つの（「ａ」（または「ａｎ」））、「１つ以上の（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」および「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」という用語は、本明細書で同じ意味で用いられ得る。]
[0022] 値の範囲を記載する際、記載される特性は、範囲内に見出される個々の値であり得ることも理解されるべきである。例えば、「約ｐＨ４〜約ｐＨ６のｐＨ」は、ｐＨ４、４．２、４．６、５．１、５．５等に限定されないが、かかる値の間のあらゆる値であり得る。さらに、「約ｐＨ４〜約ｐＨ６のｐＨ」は、着目製剤のｐＨは、保存中、ｐＨ４〜ｐＨ６の範囲中、２ｐＨ単位変動することを意味すると解釈されるべきではなく、むしろ、溶液のｐＨに対するその範囲内で選ばれ得、ｐＨは、およそ、そのｐＨに緩衝されたままである。いくつかの実施形態において、「約（ａｂｏｕｔ）」という用語を使用する際、その列挙された数字のプラスマイナス５％、１０％、１５％またはそれ以上を意味する。意図された実際の変動は、文脈から決定できる。出願者は、本明細書に記載の本発明の全範囲を考案したが、出願者は、他の先行技術に記載される主題を主張することを意図しない。したがって、特許請求の範囲内の法定の先行技術が、特許庁または他の団体もしくは個人によって、出願者に告知された場合には、出願者は、このような特許請求の範囲の主題を定義し直して、このような特許請求の範囲からこのような法定の先行技術または法定の先行技術の自明な変形を具体的に除外するために、準拠する特許法に基づいて補正を行う権利を留保するものとする。このような補正された特許請求の範囲によって定義される本発明の変形も、本発明の態様として意図される。]
図面の簡単な説明

[0023] フェロポーチン膜貫通および細胞外ドメインの２つの概略図を示す。
フェロポーチン膜貫通および細胞外ドメインの２つの概略図を示す。
抗フェロポーチン抗体３１Ａ５が、フェロポーチンペプチド配列（ＡＮＩＶＰＥＴＳＰＥＳ、配列番号１６の残基４３９〜４４９）を認識することを示す。
抗フェロポーチン抗体３１Ａ５が、対外鉄反応アッセイにおいて、フェロポーチン鉄輸出活性を持続することを示す。
抗フェロポーチン抗体３１Ａ５が、内部移行および分解からフェロポーチンを保護することを示す。
抗フェロポーチン抗体３１Ａ５が、内部移行および分解からフェロポーチ
抗フェロポーチン抗体３１Ａ５が、免疫組織化学によって、細胞上のフェロポーチン発現を検出することを示す。
抗フェロポーチン抗体３１Ａ５が、免疫組織化学によって、細胞上のフェロポーチン発現を検出することを示す。
抗体３７Ａ２（配列番号３２〜３４）、３７Ｂ９（配列番号４２〜４４）、３７Ｃ８（配列番号５２〜５４）、３７Ｇ８（配列番号６２〜６４）、３８Ａ４（配列番号７２〜７４）、３８Ｃ８（配列番号８２〜８４）、３８Ｄ２（配列番号９２〜９４）、３８Ｅ３（配列番号１０２〜１０４）および３８Ｇ６（配列番号１１２〜１１４）に対する重鎖ＣＤＲを提供する。
抗体３７Ａ２（配列番号２９〜３１）、３７Ｂ９（配列番号３９〜４１）、３７Ｃ８（配列番号４９〜５１）、３７Ｇ８（配列番号５９〜６１）、３８Ａ４（配列番号６９〜７１）、３８Ｃ８（配列番号７９〜８１）、３８Ｄ２（配列番号８９〜９１）、３８Ｅ３（配列番号９９〜１０１）および３８Ｇ６（配列番号１０９〜１１１）に対する軽鎖ＣＤＲを提供する。
抗体３８Ｇ６および３８Ｅ３の重鎖および軽鎖可変領域のｃＤＮＡおよびアミノ酸配列を提供する。
抗体３８Ｄ２および３８Ｃ８の重鎖および軽鎖可変領域のｃＤＮＡおよびアミノ酸配列を提供する。
抗体３８Ａ４および３７Ｇ８の重鎖および軽鎖可変領域のｃＤＮＡおよびアミノ酸配列を提供する。
抗体３７Ｃ８および３７Ｂ９の重鎖および軽鎖可変領域のｃＤＮＡおよびアミノ酸配列を提供する。
抗体３７Ａ２の重鎖および軽鎖可変領域のｃＤＮＡおよびアミノ酸配列を提供する。
機能的および非機能的抗フェロポーチン抗体が、フェロポーチン上に類似のエピトープを認識することを示す。]
[0024] （詳細な説明）
フェロポーチン（配列番号１６）は、１０あるいは１２の膜貫通ドメインを有することが予測されるマルチ膜貫通タンパク質である。トポロジー図に基づいて、２０％未満の残基が、細胞外であることが予測され、最長細胞外ループは、わずか５７残基長さであることが予測される。図１は、フェロポーチン膜貫通および細胞外ドメインの２つの概略図を示す。図１Ａにおいて、細胞外ドメインは、配列番号１６のアミノ酸４６〜６０（ループ１）、１１６〜１２６（ループ２）、２０４〜２０５および３２５〜３４２（ループ３）、３９４〜４４９（ループ４）ならびに５１３〜５１７（ループ５）に対応する。図１Ｂにおいて、細胞外ドメインは、配列番号１６のアミノ酸３５〜５７（ループ１）、１１６〜１２４（ループ２）、３３２−３４０（ループ３）、３９３−４４９（ループ４）および５１５−５１８（ループ５）に対応する。] 図１Ａ 図１Ｂ
[0025] 本発明の実施形態は、フェロポーチン、または（図１Ａまたは１Ｂに示されるような）フェロポーチンのループ１、２、３および４、またはそのフラグメントに、高い親和性で結合する、モノクローナル抗体を提供する。本発明の他の実施形態は、正常な鉄ホメオスタシスを有する対象、あるいは、ヘプシジンレベルの上昇から起こる障害を含む、鉄ホメオスタシスの障害の危険性があるもしくは罹患している対象において、フェロポーチン活性を持続し、かつ血中鉄レベルを増加させることができる、モノクローナル抗体等の抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体は、フェロポーチン表面発現へのヘプシジンの効果を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体は、フェロポーチンのヘプシジン媒介分解を含むフェロポーチンの内部移行および分解を防ぎ、それによって、鉄ホメオスタシスを維持する。] 図１Ａ
[0026] Ｉ．抗フェロポーチン抗体および特異的結合剤
「抗体」という用語は、最も広範な意味で使用され、完全に組み立てられた抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、抗原（Ｆａｂ’、Ｆ’（ａｂ）２、Ｆｖ、単鎖抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）を含む）に結合することができる抗体フラグメント、ならびにそれらが所望の生物活性を示す限り、前述のものを含む組換えペプチドを含む。化学的に誘導体化された抗体を含む、無傷分子および／またはフラグメントのマルチマーまたは会合体が、企図される。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む、任意のアイソタイプクラスもしくはサブクラスの抗体、または任意のアロタイプの抗体が、企図される。異なるアイソタイプは、異なるエフェクター機能を有する、例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。]
[0027] いくつかの実施形態において、抗体は、ＫＤ（平衡解離定数）によって測定して、ｌ×１０−６Ｍ以下の範囲、または１０−１６Ｍもしくはそれを下回る範囲までに及ぶ（例えば、約１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３、１０−１４、１０−１５、１０−１６Ｍ以下）フェロポーチンに対する結合親和性等の所望の特性を示す。より高いまたはより良好な親和性は、より低いＫＤによって特徴付けられる。平衡解離定数の推定値は、抗体濃度の範囲にわたって、フェロポーチン発現細胞に結合する抗体を監視することによって決定され得る。親和性を結合する抗体を決定するために、ヒトフェロポーチンを誘導可能に発現するように改変されるＨＥＫ２９３細胞株を、９６ウェル黒壁の透明底ポリ−Ｄ−リシンコートされたプレート（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ ＮＪ）の１ウェルあたり５０，０００細胞で播種し、クエン酸酸化鉄の存在下でフェロポーチンを発現するために、Ｔｅｔ誘導システムにおいて、１０μｇ／ｍＬの最終濃度のドキシサイクリンを用いて、誘発する。導入試薬を除去する際、次いで細胞の培地を冷ＤＭＥＭ１０％ ＦＢＳ１×ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン中における漸増量の抗体で、交換し、４℃で３０分間温置する。この後、２００μＬ／ウェルの冷ＰＢＳで、細胞を４回軽く洗浄し、飽和濃度（５μｇ／ｍＬ）の抗マウスＨ＋Ｌ ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ４８８複合体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｉｎｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）で温置し、暗闇で、４℃で３０分間温置する。これが完了すると、次に２００μＬ／ウェルの冷ＰＢＳで細胞を４回洗浄し、１００μＬ／ウェルの冷ＰＢＳ中に放置し、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）等の蛍光光度計上の相対的蛍光強度を直ちに読み出す。その後、蛍光強度データから、結合曲線が構築され、これらのＥＣ５０は、次いで、おおよそのＫＤを示す。]
[0028] 他の実施形態において、抗体は、フェロポーチンに対して特異性を示す。本明細書で使用する、抗体は、異なるファミリーにおける他の非関連たんぱく質と比較する際、ヒトフェロポーチンに対して有意により高い結合親和性を有し、したがって、識別可能である場合、「ヒトフェロポーチンに対して特異的（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｏｒ）」または「ヒトフェロポーチンに特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」。いくつかの実施形態において、かかる抗体はまた、マウス、ラット、または霊長類のフェロポーチン等の他の種のフェロポーチンと交差反応し得る一方、他の実施形態において、該抗体は、ヒトまたは霊長類のフェロポーチンにのみ結合し、齧歯類のフェロポーチンに対しては有意には結合しない。]
[0029] さらに他の実施形態において、抗体は、フェロポーチン持続を促進することが可能である。本明細書で使用する、「フェロポーチン持続（Ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ）」または「フェロポーチン活性の持続（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ）」とは、フェロポーチンによって調節される鉄排出を増加させるまたは維持する能力を指し、抗体の不在下での、鉄排出のレベルと比較して、フェロポーチン持続を促進する抗体の存在下で、鉄排出のレベルの相対的な増加として検出され得る。例えば、フェロポーチン持続を促進する抗体の存在下で、鉄排出は、増加し得、細胞内鉄レベルは、減少し得る、および／または血中鉄レベルは、増加し得る。いくつかの実施形態において、フェロポーチン持続は、正常細胞および正常な対象において生じ得る。他の実施形態において、フェロポーチン持続は、例えば、ヘプシジンのような、フェロポーチン持続がなければ、フェロポーチンによって調節される鉄排出を変化させ得るであろう分子の存在下で、生じ得る。いくつかの実施形態において、フェロポーチン持続は、１００％、または約９９％、または約９８％、または約９７％、または約９６％、または約９５％、または約９４％、または約９３％、または約９２％、または約９１％、または約９０％、または約８５％、または約８０％、または約約７５％もしくはそれ以下でフェロポーチンを分解するのに有効なヒトヘプシジンの量の存在下で、生じ得る。いくつかの実施形態において、フェロポーチン持続は、鉄ホメオスタシスの障害に罹患している細胞または対象において生じ得る。いくつかの実施形態において、抗体は、約１０−６Ｍ以下、または約１０−７Ｍ以下、または約１０−８Ｍ以下、または約１０−９Ｍ以下のＥＣ５０で、細胞内鉄濃度を低下させる、および／または血中鉄濃度を増加させる。フェロポーチン活性を持続するおよび／または鉄排出を維持するための抗体の能力は、実施例３に記述しているもの等のアッセイによって検出することができる。種々の実施形態において、ヘプシジンの存在下で、抗体は、約１０−６Ｍ以下、または約１０−７Ｍ以下、または約１０−８Ｍ以下、または約１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で、細胞内鉄濃度を低下させる、および／または血中鉄濃度を増加させる。]
[0030] いくつかの実施形態において、体外で、および好ましくは生体内でも、ヘプシジン依存の内部移行および／または分解を含むフェロポーチンの内部移行および／または分解を阻害する（または中和させる）抗体を提供する。フェロポーチンの内部移行および／または分解を阻害するための抗体の能力は、実施例６に記述しているもの等のアッセイによって検出することができる。例示的な態様において、モノクローナル抗体は、高い鉄レベル（および／または炎症）に反応して生じるフェロポーチンの分解を阻害する（または中和させる）。いくつかの実施形態において、フェロポーチンへのヘプシジンの結合は、本明細書に開示されるフェロポーチンを持続する抗体によって阻害されない。]
[0031] フェロポーチン持続が可能な抗フェロポーチン抗体は、鉄ホメオスタシスの障害に治療的に有用であり、１つ以上のマーカー、例えば、フェリチン／鉄レベル、赤血球数、赤血球特性（ヘモグロビン含有量および／もしくは細胞体積）、早期赤血球特性（網状赤血球数、ヘモグロビン含有量もしくは細胞体積）（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ；ｅｄｉｔｏｒ Ｍａｒｙ Ｌ．Ｔｕｒｇｅｏｎ，１９９９）、または鉄輸送を通して測定されるように、血清鉄レベルを増加させる、ならびに／または赤血球数もしくは特性を改善することが期待される。]
[0032] 特定の例示的な実施形態において、本発明は、以下を企図する。
１）抗体３１Ａ５、３７Ａ２、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ａ４、３８Ｃ８、３８Ｄ２、３８Ｅ３および３８Ｇ６の任意の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２もしくはＣＤＲＬ３を保有し、任意に、かかる単数または複数のＣＤＲにおける、１つまたは２つの変異体を含む、モノクローナル抗体、
２）抗体３１Ａ５、３７Ａ２、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ａ４、３８Ｃ８、３８Ｄ２、３８Ｅ３および３８Ｇ６のすべてのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、または重鎖可変領域を保有し、任意に、かかる単数または複数のＣＤＲにおける、１つまたは２つの変異体を含む、モノクローナル抗体、
３）抗体３１Ａ５、３７Ａ２、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ａ４、３８Ｃ８、３８Ｄ２、３８Ｅ３および３８Ｇ６のすべてのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、または軽鎖可変領域を保有し、任意に、かかる単数または複数のＣＤＲにおける、１つまたは２つの変異体を含む、モノクローナル抗体、
４）例えば、Ｘ線結晶学または重水素交換質量分析、アラニンスキャニングおよびペプチドフラグメントＥＬＩＳＡ等の他の生物物理学的もしくは生化学的技法を通して決定される、抗体３１Ａ５、３７Ａ２、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ａ４、３８Ｃ８、３８Ｄ２、３８Ｅ３および３８Ｇ６と同一のフェロポーチンの線状もしくは立体的エピトープに結合するモノクローナル抗体、
５）フェロポーチン（配列番号１６）のアミノ酸残基３９３〜４４６からなるペプチドに結合し、いくつかの実施形態において、配列番号１６のアミノ酸残基７５〜９６、１５２〜１８３、３３０〜３３８または５４２〜５７１に結合しない、モノクローナル抗体、
６）フェロポーチン（配列番号１６）のアミノ酸残基４３９〜４４９からなるペプチドに結合するモノクローナル抗体、ならびに
７）約７５％以上、約８０％以上、または約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、または９５％以上でヒトフェロポーチンに結合するために、抗体３１Ａ５、３７Ａ２、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ａ４、３８Ｃ８、３８Ｄ２、３８Ｅ３および３８Ｇ６のうちのいずれか１つと競合するモノクローナル抗体。]
[0033] 一実施形態において、抗体は、配列番号５〜１０（３１Ａ５ＣＤＲ）からなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはすべてのアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号２９〜３４（３７Ａ２ ＣＤＲ）からなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはすべてのアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号３９〜４４（３７Ｂ９ ＣＤＲ）からなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはすべてのアミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態において、抗体は、配列番号４９〜５４（３７Ｃ８ ＣＤＲ）からなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはすべてのアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号５９〜６４（３７Ｇ８ ＣＤＲ）からなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはすべてのアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号６９〜７４（３８Ａ４ ＣＤＲ）からなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはすべてのアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号７９〜８４（３８Ｃ８ ＣＤＲ）からなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはすべてのアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号８９〜９４（３８Ｄ２ ＣＤＲ）からなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはすべてのアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号９９〜１０４（３８Ｅ３ ＣＤＲ）からなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはすべてのアミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態において、抗体は、配列番号１０９〜１１４（３８Ｇ６ ＣＤＲ）からなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つもしくはすべてのアミノ酸配列を含む。]
[0034] いくつかの実施形態において、抗体は、３本の軽鎖ＣＤＲすべて、３本の重鎖ＣＤＲすべて、または６本のＣＤＲすべてを含む。いくつかの例示的な実施形態において、１つの抗体からの２本の軽鎖ＣＤＲは、異なる抗体からの第３の軽鎖ＣＤＲと組み合わされ得る。代替として、１つの抗体からのＣＤＲＬ１は、異なる抗体からのＣＤＲＬ２およびさらに別の抗体からのＣＤＲＬ３と組み合わされ得、特に、ここで、ＣＤＲは、高度の相同性を示す。同様に、１つの抗体からの２本の重鎖ＣＤＲは、異なる抗体からの第３の重鎖ＣＤＲと組み合わされ得る、または１つの抗体からのＣＤＲＨ１は、異なる抗体からのＣＤＲＨ２およびさらに別の抗体からのＣＤＲＨ３と組み合わされ得、特に、ここで、ＣＤＲは、高度の相同性を示す。図６は、抗体３７Ａ２（配列番号３２〜３４）、３７Ｂ９（配列番号４２〜４４）、３７Ｃ８（配列番号５２〜５４）、３７Ｇ８（配列番号６２〜６４）、３８Ａ４（配列番号７２〜７４）、３８Ｃ８（配列番号８２〜８４）、３８Ｄ２（配列番号９２〜９４）、３８Ｅ３（配列番号１０２〜１０４）および３８Ｇ６（配列番号１１２〜１１４）に対する重鎖ＣＤＲを提供する。図７は、抗体３７Ａ２（配列番号２９〜３１）、３７Ｂ９（配列番号３９〜４１）、３７Ｃ８（配列番号４９〜５１）、３７Ｇ８（配列番号５９〜６１）、３８Ａ４（配列番号６９〜７１）、３８Ｃ８（配列番号７９〜８１）、３８Ｄ２（配列番号８９〜９１）、３８Ｅ３（配列番号９９〜１０１）および３８Ｇ６（配列番号１０９〜１１１）に対する軽鎖ＣＤＲを提供する。] 図６ 図７
[0035] コンセンサスＣＤＲも使用してもよい。一実施形態において、抗体は、配列番号４２（ＧＹＹＭＨ、抗体３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ｃ８および３８Ｅ３からの重鎖ＣＤＲ１）、配列番号１１５（ＧＹＸＭＨ、３７Ａ２、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ｃ８、および３８Ｅ３からの重鎖ＣＤＲ１コンセンサス）、配列番号１１６（ＧＹＹＸＨ、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ｃ８、３８Ｄ２および３８Ｅ３からの重鎖ＣＤＲ１コンセンサス）、配列番号１１７（ＷＩＮＰＨＴＧＧＫＮＹＸＱＸＦＱＧ、抗体３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ｃ８および３８Ｅ３からの重鎖ＣＤＲ２コンセンサス）、配列番号１１８（ＤＰＳＸＸＶＸＧＰＳＦＹＹＸＧＬＤＶ、抗体３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ｃ８および３８Ｅ３からの重鎖ＣＤＲ３コンセンサス）、配列番号１１９（ＫＩＳＮＲＸＳ、抗体３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ｃ８および３８Ｅ３からの軽鎖ＣＤＲ２コンセンサス）からなる群から選択される、１つ以上のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘは、いずれかのアミノ酸である。]
[0036] 種々の実施形態において、抗体は、ＷＩＮＰＨＴＧＧＫＮＹＸ１ＱＸ２ＦＱＧ（配列番号１３６）を含み、式中、Ｘ１およびＸ２は、いずれかのアミノ酸である、またはＸ１およびＸ２は、Ａ、Ｇ、Ｋ、もしくはＲ、これらのいずれかの組み合わせ、またはこれらの同類置換である、またはＸ１は、ＡもしくはＧ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ２は、いずれかのアミノ酸である、またはＸ１は、いずれかのアミノ酸であり、かつＸ２は、ＫもしくはＲ、またはこれらの同類置換である、またはＸ１は、ＡもしくはＧ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ２は、ＫもしくはＲまたはこれらの同類置換である。]
[0037] 種々の他の実施形態において、抗体は、アミノ酸配列ＷＩＮＰＨＴＧＧＫＮＹＸ１ＱＸ２ＦＱＧ（配列番号１３６）（式中、Ｘ１およびＸ２は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｒ、これらのいずれかの組み合わせ、またはこれらの同類置換である）、およびアミノ酸配列ＤＰＳＸ１Ｘ２ＶＸ３ＧＰＳＦＹＹＸ４ＧＬＤＶ（配列番号１３７）（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、Ａ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、これらのいずれかの組み合わせ、またはこれらの同類置換である）を含む。]
[0038] 種々の実施形態において、抗体は、アミノ酸配列ＤＰＳＸ１Ｘ２ＶＸ３ＧＰＳＦＹＹＸ４ＧＬＤＶ（配列番号１３７）を含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、いずれかのアミノ酸である；またはＸ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、Ａ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、これらのいずれかの組み合わせ、もしくはこれらの同類置換である；またはＸ１は、ＩもしくはＬまたはこれらの同類置換であり、かつＸ２、Ｘ３およびＸ４は、いずれかのアミノ酸である；またはＸ２は、Ａ、Ｖ、もしくはＳ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ１、Ｘ３およびＸ４は、いずれかのアミノ酸である；またはＸ３は、ＡもしくはＴ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ１、Ｘ２およびＸ４は、いずれかのアミノ酸である；またはＸ４は、ＹもしくはＦ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ１、Ｘ２およびＸ３は、いずれかのアミノ酸である；またはＸ１は、ＩもしくはＬ、またはこれらの同類置換であり、Ｘ２は、Ａ、ＶもしくはＳ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ３およびＸ４は、いずれかのアミノ酸である；またはＸ１は、いずれかのアミノ酸であり、Ｘ２は、Ａ、ＶもしくはＳ、またはこれらの同類置換であり、Ｘ３は、ＡもしくはＴ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ４は、いずれかのアミノ酸である；またはＸ１およびＸ２は、いずれかのアミノ酸であり、Ｘ３は、ＡもしくはＴ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ４は、ＹもしくはＦ、またはこれらの同類置換である；またはＸ１、Ｘ２およびＸ３は、いずれかのアミノ酸であり、かつＸ４は、ＹもしくはＦ、またはこれらの同類置換である、またはＸ１は、ＩもしくはＬ、またはこれらの同類置換であり、Ｘ２は、Ａ、Ｖ、もしくはＳ、またはこれらの同類置換であり、Ｘ３は、ＡもしくはＴ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ４は、ＹもしくはＦ、またはこれらの同類置換である；Ｘ２およびＸ３は、いずれかのアミノ酸であり、Ｘ１は、ＩもしくはＬ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ４は、ＹもしくはＦ、またはこれらの同類置換である；またはＸ１およびＸ２は、いずれかのアミノ酸であり、Ｘ３は、ＡもしくはＴ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ４は、ＹもしくはＦ、またはこれらの同類置換である；またはＸ１およびＸ３は、いずれかのアミノ酸であり、Ｘ２は、Ａ、ＶもしくはＳ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ４は、ＹもしくはＦ、またはこれらの同類置換である；またはＸ１およびＸ４は、いずれかのアミノ酸であり、Ｘ２は、Ａ、ＶもしくはＳ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ３は、ＡもしくはＴ、またはこれらの同類置換である；またはＸ１、Ｘ２、およびＸ３は、いずれかのアミノ酸であり、かつＸ４は、ＹもしくはＦ、またはこれらの同類置換である；またはＸ１、Ｘ２、およびＸ４は、いずれかのアミノ酸であり、かつＸ３は、ＡもしくはＴ、またはこれらの同類置換である；またはＸ１、Ｘ３、およびＸ４は、いずれかのアミノ酸であり、かつＸ２は、Ａ、ＶもしくはＳ、またはこれらの同類置換であり、あるいはＸ２、Ｘ３、およびＸ４は、いずれかのアミノ酸であり、かつＸ１は、ＩもしくはＬ、またはこれらの同類置換である；またはＸ１は、ＩもしくはＬ、またはこれらの同類置換であり、Ｘ２は、いずれかのアミノ酸であり、Ｘ３は、ＡもしくはＴ、またはこれらの同類置換であり、かつＸ４は、いずれかのアミノ酸である。]
[0039] 本明細書に開示されるコンセンサスＣＤＲのうちのいずれも、いずれの抗体の同一の鎖（例えば、重鎖または軽鎖）からの２つの他のＣＤＲとも組み合わされ、例えば、好適な重鎖または軽鎖可変領域を形成することができる。]
[0040] さらに別の実施形態において、抗体は、抗体３１Ａ５の重鎖および／または軽鎖可変領域、例えば、配列番号４（３１Ａ５重鎖可変領域）、および／または配列番号２（３１Ａ５軽鎖可変領域）を含む。別の実施形態において、抗体は、抗体３７Ａ２の重鎖および／または軽鎖可変領域、例えば、配列番号２８（３７Ａ２重鎖可変領域）および／または配列番号２６（３７Ａ２軽鎖可変領域）を含む。別の実施形態において、抗体は、抗体３７Ｂ９の重鎖および／または軽鎖可変領域、例えば、配列番号３８（３７Ｂ９重鎖可変領域）および／または配列番号３６（３７Ｂ９軽鎖可変領域）を含む。別の実施形態において、抗体は、抗体３７Ｃ８の重鎖および／または軽鎖可変領域、例えば、配列番号４８（３７Ｃ８重鎖可変領域）および／または配列番号４６（３７Ｃ８軽鎖可変領域）を含む。別の実施形態において、抗体は、抗体３７Ｇ８の重鎖および／または軽鎖可変領域、例えば、配列番号５８（３７Ｇ８重鎖可変領域）および／または配列番号５６（３７Ｇ８軽鎖可変領域）を含む。別の実施形態において、抗体は、抗体３８Ａ４の重鎖および／または軽鎖可変領域、例えば、配列番号６８（３８Ａ４重鎖可変領域）および／または配列番号６６（３８Ａ４軽鎖可変領域）を含む。別の実施形態において、抗体は、抗体３８Ｃ８の重鎖および／または軽鎖可変領域、例えば、配列番号７８（３８Ｃ８重鎖可変領域）および／または配列番号７６（３８Ｃ８軽鎖可変領域）を含む。さらに別の実施形態において、抗体は、抗体３８Ｄ２の重鎖および／または軽鎖可変領域、例えば、配列番号８８（３８Ｄ２重鎖可変領域）および／または配列番号８６（３８Ｄ２軽鎖可変領域）を含む。別の実施形態において、抗体は、抗体３８Ｅ３の重鎖および／または軽鎖可変領域、例えば、配列番号９８（３８Ｅ３重鎖可変領域）および／または配列番号９６（３８Ｅ３軽鎖可変領域）を含む。別の実施形態において、抗体は、抗体３８Ｇ６の重鎖および／または軽鎖可変領域、例えば、配列番号１０８（３８Ｇ６重鎖可変領域）および／または配列番号１０６（３８Ｇ６軽鎖可変領域）を含む。]
[0041] いくつかの実施形態において、配列番号４（３１Ａ５重鎖可変領域）、２（３１Ａ５軽鎖可変領域、２８（３７Ａ２重鎖可変領域）、２６（３７Ａ２軽鎖可変領域）、３８（３７Ｂ９重鎖可変領域）、３６（３７Ｂ９軽鎖可変領域）、４８（３７Ｃ８重鎖可変領域）、４６（３７Ｃ８軽鎖可変領域）、５８（３７Ｇ８重鎖可変領域）、５６（３７Ｇ８軽鎖可変領域）、６８（３８Ａ４重鎖可変領域）、６６（３８Ａ４軽鎖可変領域）、７８（３８Ｃ８重鎖可変領域）、７６（３８Ｃ８軽鎖可変領域）、８８（３８Ｄ２重鎖可変領域）、８６（３８Ｄ２軽鎖可変領域）、９８（３８Ｅ３重鎖可変領域）、９６（３８Ｅ３軽鎖可変領域）、１０８（３８Ｇ６重鎖可変領域）および１０６（３８Ｇ６軽鎖可変領域）からなる群から選択されるアミノ酸配列に少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む抗体を提供し、該ポリペプチドは、配列番号５〜１０（３１Ａ５ＣＤＲ）、２９〜３４（３７Ａ２）、３９〜４４（３７Ｂ９）、４９〜５４（３７Ｃ８）、５９〜６４（３７Ｇ８）、６９〜７４（３８Ａ４）、７９〜８４（３８Ｃ８）、８９〜９４（３８Ｄ２）、９９〜１０４（３８Ｅ３）、および１０９〜１１４（３８Ｇ６）に記述されている少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれ以上のアミノ酸配列をさらに含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域に対して百分率同一性を有するポリペプチドは、１つ、２つまたは３つの軽鎖ＣＤＲを含み得る。他の実施形態において、重鎖可変領域に対して百分率同一性を有するポリペプチドは、１つ、２つまたは３つの重鎖ＣＤＲを含み得る。前述の実施形態のいずれにおいても、ポリペプチドは、配列番号５〜１０（３１Ａ５ ＣＤＲ）、２９〜３４（３７Ａ２）、３９〜４４（３７Ｂ９）、４９〜５４（３７Ｃ８）、５９〜６４（３７Ｇ８）、６９〜７４（３８Ａ４）、７９〜８４（３８Ｃ８）、８９〜９４（３８Ｄ２）、９９〜１０４（３８Ｅ３）、および１０９〜１１４（３８Ｇ６）に記述しているアミノ酸配列のいずれかに１つまたは２つの改変を含む配列を含むことができる。]
[0042] また、３４Ｇ３、３７Ａ２、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ａ４、３８Ｃ８、３８Ｄ２、３８Ｄ６、３８Ｅ３および３８Ｇ６からなる群から選択される抗体の重鎖および軽鎖可変領域に対して少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む抗体も企図され、該ポリペプチドは、３１Ａ５ＣＤＲ、３７Ａ２ ＣＤＲ、３７Ｂ９ ＣＤＲ、３７Ｃ８ ＣＤＲ、３７Ｇ８ ＣＤＲ、３８Ａ４ ＣＤＲ、３８Ｃ８ ＣＤＲ、３８Ｄ２ ＣＤＲ、３８Ｅ３ ＣＤＲおよび３８Ｇ６ ＣＤＲからなる群から選択される少なくとも１つ以上のＣＤＲをさらに含む。前述の実施形態のいずれにおいても、ポリペプチドは、３１Ａ５ ＣＤＲ、３７Ａ２ ＣＤＲ、３７Ｂ９ ＣＤＲ、３７Ｃ８ ＣＤＲ、３７Ｇ８ ＣＤＲ、３８Ａ４ ＣＤＲ、３８Ｃ８ ＣＤＲ、３８Ｄ２ ＣＤＲ、３８Ｅ３ ＣＤＲおよび３８Ｇ６ ＣＤＲからなる群から選択されるＣＤＲに対して１つまたは２つの修飾を含む配列を含む。]
[0043] 抗体３１Ａ５の全長軽鎖および重鎖に対するｃＤＮＡおよびアミノ酸配列も提供する。定常領域を含む、抗体３１Ａ５の全長軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列は、配列番号１１に記述されている。定常領域を含む、抗体３１Ａ５の全長軽鎖をコードするアミノ酸配列は、配列番号１２（このうちの残基１〜２０は、シグナルペプチドに対応し、残りは、成熟ポリペプチドである）に記述されている。定常領域を含む、抗体３１Ａ５の全長重鎖をコードするｃＤＮＡ配列は、配列番号１３に記述されている。定常領域を含む、抗体３１Ａ５の全長重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１４（このうちの残基１〜１７は、シグナルペプチドに対応し、残りは、成熟ポリペプチドである）に記述されている。]
[0044] 別の実施形態において、抗体は、抗体３４Ｇ３、３７Ａ２、３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ａ４、３８Ｃ８、３８Ｄ２、３８Ｅ３および３８Ｇ６のいずれかの重鎖可変領域を含み、任意に、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域（配列番号１２０〜１２１）およびヒトＩｇＧ２重鎖定常領域（配列番号１２２〜１２３）からなる群から選択される定常領域を含む。別の例示的な実施形態において、抗体は、抗体３７Ｂ９、３７Ｃ８、３７Ｇ８、３８Ａ４、３８Ｃ８、３８Ｄ２および３８Ｅ３のいずれかの軽鎖可変領域を含み、任意に、ヒトカッパ軽鎖定常領域（配列番号１２４〜１２５）を含む。別の例示的な実施形態において、抗体は、抗体３７Ａ２および３８Ｇ６のいずれかの軽鎖可変領域を含み、任意に、ヒトラムダ軽鎖可変領域Ｃ１型（配列番号１２６〜１２７）、ヒトラムダ軽鎖可変領域Ｃ２型（配列番号１２８〜１２９）、ヒトラムダ軽鎖定常領域Ｃ３型（配列番号１３０〜１３１）、ヒトラムダ軽鎖定常領域Ｃ６型（配列番号１３２〜１３３）およびヒトラムダ軽鎖定常領域Ｃ７型（配列番号１３４〜１３５）からなる群から選択される定常領域を含む。]
[0045] 本明細書で使用する「モノクローナル抗体」という用語は、その用語が本明細書に定義される、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す、即ち、集団を成す個々の抗体が、ハイブリドーマから産生されるか組換えＤＮＡ技法から産生されるかにかかわらず、少量で存在し得る、自然発生する可能な突然変異体または代替的な翻訳後の改変を除いては同一である。モノクローナル抗体の限定されない例には、マウス、ウサギ、ラット、ニワトリ、キメラ化、ヒト化、もしくはヒト抗体、完全に組み立てられた抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、抗原（Ｆａｂ’、Ｆ’（ａｂ）２、Ｆｖ、単鎖抗体、ダイアボディを含む）、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）またはナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）に結合することができる抗体フラグメント、ならびにそれらが所望の生物活性を示す限り、前述のものを含む組換えペプチド、またはその変形体もしくは誘導体が含まれる。さらにヒトのようであるヒト化または改変抗体配列は、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２ ５２５（１９８６）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１：６８５１ ６８５５（１９８４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｏｉ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４：６５ ９２（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４ １５３６（１９８８）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．２８：４８９ ４９８（１９９１）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１（３）：１６９ ２１７（１９９４）、およびＫｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．４（７）：７７３ ８３（１９９１）、Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２，２９６８−２９７６）、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８０５−８１４（１９９４）に記載され、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ヒトモノクローナル抗体を単離するための一方法は、ファージディスプレイの使用である。ファージディスプレイは、例えば、Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．、ＷＯ９１／１７２７１、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．、ＷＯ９２／０１０４７、およびＣａｔｏｎ ａｎｄ Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６４５０−６４５４（１９９０）に記載され、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ヒトモノクローナル抗体を単離するための別の方法は、内因性免疫グロブリン産生を持たず、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むように改変されたトランスジェニック動物を使用することである。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）、ＷＯ９１／１０７４１、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９８／２４８９３、または米国特許出願公開第２００３０１９４４０４号、第２００３００３１６６７号、または第２００２０１９９２１３号を参照されたく、それぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。]
[0046] 「単離された」抗体とは、その自然環境の成分から同定されている、および分離されている、抗体（この用語は本名最初で定義されるとおりである）を指す。その自然環境の汚染成分とは、抗体の診断または治療への使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質様または非タンパク質様溶質が含まれ得る。ある実施形態において、抗体は、（１）抗体の９５重量％を超える、最も好ましくは９９重量％以上まで、（２）Ｎ末端あるいは内部アミノ酸配列の少なくとも１５の残基を得るのに充分な程度まで、（３）クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた還元あるいは非還元条件下で、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性が得られるまで、精製され得る。抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、単離された自然発生抗体には、組換え細胞内の原位置抗体が含まれる。しかしながら、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製される。]
[0047] 「免疫グロブリン」または「自然抗体」は、四量体糖タンパク質である。自然発生免疫グロブリンにおいて、各四量体は、同一の２組のポリペプチド鎖からなり、各組は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分には、抗原認識に主に関与する約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の「可変」（「Ｖ」）領域が含まれる。各鎖のカルボキシ末端部分は、定常領域を定義し、重鎖の定常領域は、エフェクター機能に主に関与する。免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して異なるクラスに割り当てられ得る。重鎖は、ミュー（μ）、デルタ（δ）、ガンマ（γ）、アルファ（α）、およびエプシロン（ε）として分類され、抗体のアイソタイプは、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして定義される。これらのうちのいくつかは、サブクラスまたはアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分けられ得る。異なるアイソタイプは、異なるエフェクター機能を有する、例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。ヒト軽鎖は、カッパ（κ）およびラムダ（λ）軽鎖として分類される。軽鎖および重鎖内で、可変および定常領域は、約１０またはそれ以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む重鎖とともに、約１２またはそれ以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって接合される。概論については、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。]
[0048] アロタイプは、抗体配列における、しばしば、定常領域における、免疫原性であり得、ヒトにおける特異的対立遺伝子によりコードされる変異である。アロタイプは、ヒトＩＧＨＣ遺伝子の５つである、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＡ２およびＩＧＨＥ遺伝子について同定されており、それぞれ、Ｇ１ｍ、Ｇ２ｍ、Ｇ３ｍ、Ａ２ｍ、およびＥｍアロタイプと命名される。少なくとも１８のＧｍアロタイプ：ｎＧ１ｍ（１）、ｎＧ１ｍ（２）、Ｇ１ｍ（１、２、３、１７）またはＧ１ｍ（ａ、ｘ、ｆ、ｚ）、Ｇ２ｍ（２３）またはＧ２ｍ（ｎ）、Ｇ３ｍ（５、６、１０、１１、１３、１４、１５、１６、２１、２４、２６、２７、２８）またはＧ３ｍ（ｂ１、ｃ３、ｂ５、ｂ０、ｂ３、ｂ４、ｓ、ｔ、ｇ１、ｃ５、ｕ、ｖ、ｇ５）が知られている。２つのＡ２ｍアロタイプＡ２ｍ（１）およびＡ２ｍ（２）がある。]
[0049] 抗体の構造および生成の詳細に関しては、Ｒｏｔｈ，Ｄ．Ｂ．，ａｎｄ Ｃｒａｉｇ，Ｎ．Ｌ．，Ｃｅｌｌ，９４：４１１−４１４（１９９８）を参照されたく、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。簡潔に述べると、重鎖および軽鎖の免疫グロブリン配列をコードするＤＮＡを生成するためのプロセスは、主に、成長するＢ細胞内で起こる。種々の免疫グロブリン遺伝子セグメントを再編成および接合する前に、Ｖ、Ｄ、Ｊおよび定常（Ｃ）遺伝子セグメントは、概して、単一の染色体上で相対的に近接近において見出される。Ｂ細胞の分化中、Ｖ、Ｄ、Ｊ（または、軽鎖遺伝子の場合、ＶおよびＪのみ）遺伝子セグメントのそれぞれの適切なファミリーメンバーのうちの１つは、重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子の機能的に再編成された可変領域を形成するように再結合される。この遺伝子セグメント再編成プロセスは、順次的であると考えられる。第１に、重鎖Ｄ〜Ｊ接合が作られ、次いで、重鎖ＶからＤＪへの接合と軽鎖ＶからＪへの接合が成される。Ｖ、ＤおよびＪセグメントの再編成に加えて、軽鎖内のＶおよびＪセグメントが接合され、かつ重鎖のＤおよびＪセグメントが接合される位置で、可変組換え（ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）のために、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の一次レパートリーにおいて生成される。軽鎖内のかかる変化は、一般的に、Ｖ遺伝子セグメントの最終コドンおよびＪセグメントの第１のコドン内で起こる。接合における同様の不正確性は、ＤセグメントとＪＨセグメントとの間の重鎖染色体で起こり、１０ヌクレオチドほどの大きさにわたって伸張し得る。さらに、ゲノムＤＮＡによってコードされない、いくつかのヌクレオチドは、ＤとＪＨとの間およびＶＨとＤ遺伝子セグメントの間に挿入され得る。これらのヌクレオチドの付加は、Ｎ領域多様性として知られる。かかる接合中、起こり得る、可変領域遺伝子セグメントおよび可変組換えにおけるこのような再編成の最終的な結果は、一次抗体のレパートリーの産生である。]
[0050] 「超可変」領域という用語は、相補性決定領域またはＣＤＲ（即ち、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）によって記載されるように、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）および重鎖可変ドメイン中の３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３））からのアミノ酸残基を指す。単一のＣＤＲでさえ、すべてのＣＤＲを含有する全抗原結合部位よりも低い親和性であるが、抗原を認識し、結合し得る。]
[0051] 超可変「ループ」からの残基の代替的な定義は、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）として、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９６：９０１−９１７（１９８７）によって記載される。]
[0052] 「フレームワーク」またはＦＲ残基は、超可変領域残基以外のこれらの可変領域残基である。]
[0053] 「抗体フラグメント」は、無傷免疫グロブリンの一部分、好ましくは、無傷抗体の抗原結合または可変領域を含み、抗体フラグメントから形成される多重特異性（二重特異性、三重特異性等）抗体を含む。免疫グロブリンのフラグメントは、組換えＤＮＡ技法によって、または無傷抗体の酵素もしくは化学分解によって、産生され得る。]
[0054] 抗体フラグメントの限定されない例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ（可変領域）、ドメイン抗体（ｄＡｂ、ＶＨドメインを含有する）（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６，１９８９）、相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、単鎖抗体（ｓｃＦｖ、単一ポリペプチド鎖上のＶＨおよびＶＬドメインを含有する）（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６，１９８８、およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３，１９８８、任意に、ポリペプチドリンカーを含む、および任意に、多特異性、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４））、単鎖抗体フラグメント、ダイアボディ（別の鎖の相補的ＶＬおよびＶＨドメインと組み合わせる単一ポリペプチド鎖上のＶＨおよびＶＬドメイン）（ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３））、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）（ペプチドリンカー（ヒンジなし）を介してもしくはＩｇＧヒンジを介してＣＨ３に融合されるｓｃＦｖ）（Ｏｌａｆｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２００４ Ａｐｒ；１７（４）：３１５−２３）、線状抗体（タンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ −ＣＨ１）（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５））、キレート組換え抗体（ｃｒＡｂ、同一の抗原上の２つの隣接エピトープに結合し得る）（Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２４６：３６７−７３，１９９５）、バイボディ（ｂｉｂｏｄｉｅｓ）（二重特異性Ｆａｂ−ｓｃＦｖ）またはトリボディ（ｔｒｉｂｏｄｉｅｓ）（三重特異性Ｆａｂ−（ｓｃＦｖ）（２））（Ｓｃｈｏｏｎｊａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：７０５０−５７，２０００、Ｗｉｌｌｅｍｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ Ａｎａｌｙｔ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｍｅｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．７８６：１６１−７６，２００３）、細胞内抗体（Ｂｉｏｃｃａ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ． ９：１０１−１０８， １９９０、Ｃｏｌｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１０１：１７６１６−２１，２００４）（細胞内に抗体を保持するまたは誘導する細胞シグナル配列も含み得る（Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒ ｅｔ ａｌ，ＥＭＢＯ Ｊ １４：１５４２−５１，１９９５；Ｗｈｅｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．１７：１７３３−５，２００３））、トランスボディ（ｔｒａｎｓｂｏｄｉｅｓ）（ｓｃＦｖに融合するタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含有する細胞透過性抗体）（Ｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．６４：１１０５−８，２００５）、ナノボディ（約１５ｋＤａの重鎖可変ドメイン）（Ｃｏｒｔｅｚ−Ｒｅｔａｍｏｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６４：２８５３−５７，２００４）、小モジュール免疫薬剤（ＳＭＩＰ）（ＷＯ０３／０４１６００、米国特許公開第２００３０１３３９３９号および米国特許公開第２００３０１１８５９２号）、抗原結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）抗体（ここで、ＶＨは、ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含有する定常領域と再結合する）（Ｄｅｓｍｙｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７６：２６２８５−９０，２００１、Ｅｗｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４１：３６２８−３６，２００２、米国特許公開第２００５０１３６０４９号および第２００５００３７４２１号）、ＶＨＨ含有抗体、重鎖抗体（ＨＣＡｂｓ、構造Ｈ２Ｌ２を有する２つの重鎖のホモ二量体）、またはこれらの変異体もしくは誘導体、ならびに抗体が、所望の生物学的活性を保持する限り、ＣＤＲ配列等のポリペプチドに結合する特異性抗原を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部分を含有するポリペプチドが含まれる。]
[0055] 抗体に関連して使用される、「変異体（ｖａｒｉａｎｔ）」という用語は、変異体が、所望の結合親和性または生物学的活性を保持するという条件で、可変領域および可変領域に相当する部分内の少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失、もしくは挿入を含有する抗体のポリペプチド配列を指す。加えて、本明細書に記載の抗体は、半減期もしくはクリアランス、ＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣ活性を含む、抗体のエフェクター機能を修飾するために、定常領域内にアミノ酸修飾を有し得る。かかる修飾は、例えば、癌を治療する際に、薬物動態を強化するか、または抗体の有効性を強化することができる。Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６（９）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＩｇＧ１の場合、定常領域、特に、ヒンジまたはＣＨ２領域に対する修飾により、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を含む、エフェクター機能を増加または低下させ得る。他の実施形態において、ＩｇＧ２定常領域を修飾して、抗体−抗原凝集体形成を減少させる。ＩｇＧ４の場合、定常領域、特に、ヒンジ領域に対する修飾により、半抗体の形成を減少させ得る。]
[0056] 本明細書に記載の抗体またはポリペプチドに関連して使用される、「修飾（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」という用語は、１つ以上のアミノ酸変化（置換、挿入または欠失を含む）、フェロポーチン結合活性を妨害しない化学修飾、治療用または診療用剤に活用することによる共有結合修飾、標識化（例えば、放射性核種または種々の酵素での）、ペグ化等の共有ポリマー結合（ポリエチレングリコールによる誘導体化）、および非天然アミノ酸の化学合成による挿入または置換を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明の修飾ポリペプチド（抗体を含む）は、本発明の非修飾分子の結合特性を保持するであろう。]
[0057] 本発明抗体またはポリペプチドに関連して使用される、「誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）」という用語は、治療用または診療用剤に活用することによる共有結合修飾、標識化（例えば、放射性核種または種々の酵素での）、ペグ化等の共有ポリマー結合（ポリエチレングリコールによる誘導体化）、および非天然アミノ酸の化学合成による挿入または置換により共有結合的に修飾される抗体またはポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、本発明の誘導体は、本発明の非修飾分子の結合特性を保持するであろう。]
[0058] 二重特異性または他の多重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野において既知であり、これらには、化学的架橋、ロイシンジッパーの使用（Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３，１９９２）、ダイアボディ技術（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−４８，１９９３）、ｓｃＦｖ二量体（Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８，１９９４）、線状抗体（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８：１０５７−６２，１９９５）、およびキレート組換え抗体（Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２４６：３６７−７３，１９９５）が含まれる。]
[0059] したがって、抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域の１つ、２つ、および／または３つのＣＤＲを含む、種々の組成物は、当該技術分野において既知の技法によって生成され得る。]
[0060] Ａ．抗体の組換え産生
本明細書に記載のモノクローナル抗体をコードし、任意に、核酸を含む、宿主細胞、ベクターおよび宿主細胞によって認識される配列を制御するように作用可能に連結される、単離された核酸、ならびに抗体の産生のための組換え技法も提供し、これには、核酸を発現するように宿主細胞を培養することと、任意に、宿主細胞培養または培地から抗体を回収することを含み得る。]
[0061] 対象の免疫グロブリンからの適切なアミノ酸配列は、直接タンパク質配列によって決定され得、好適なコード化ヌクレオチド配列は、汎用コドン表に従って設計することができる。代替として、モノクローナル抗体をコードするゲノムまたはｃＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）、かかる抗体を産生する細胞から単離され、配列決定され得る。]
[0062] クローニングは、標準技法を用いて実行される（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｇｕｉｄｅ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたく、これは、参照することにより本明細書に組み込まれる）。例えば、ｃＤＮＡライブラリーは、ｐｏｌｙＡ＋ｍＲＮＡ、好ましくは、膜結合ｍＲＮＡ、およびヒト免疫グロブリンポリペプチド遺伝子配列に特異的なプローブを用いてスクリーニングされたライブラリーの逆転写によって構成され得る。しかしながら、一実施形態において、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、対象の免疫グロブリン遺伝子セグメント（例えば、軽鎖または重鎖可変セグメント）をコードするｃＤＮＡ（または全長ｃＤＮＡの一部）を増幅する。増幅された配列は、任意の好適なベクター、例えば、発現ベクター、ミニ遺伝子ベクター、またはファージディスプレイベクターに容易にクローン化することができる。対象の免疫グロブリンポリペプチドのある部分の配列を決定することが可能である限り、使用される特定の方法が重要でないことが理解されよう。]
[0063] 抗体核酸のための１つの供給源は、対象の抗原の免疫を持つ動物からＢ細胞を得て、このＢ細胞を不死化細胞に融合することにより生成されるハイブリドーマである。代替として、核酸は、免疫動物のＢ細胞（または全膵臓）から単離することができる。抗体をコードする核酸のさらに別の供給源は、例えば、ファージディスプレイを通して、生成されるかかる核酸のライブラリーである。対象のペプチド、例えば、所望の結合特性を有する可変領域ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、パニング等の標準技法により同定することができる。]
[0064] 免疫グロブリンポリペプチドの全可変領域をコードする配列が、決定され得るが、時には、可変領域の一部のみ、例えば、ＣＤＲコード部分を配列決定することで十分である。配列決定は、標準技法を用いて実行される（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｇｕｉｄｅ， ３ｒｄ Ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、およびＳａｎｇｅｒ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５４６３−５４６７を参照されたく、これは、参照することにより本明細書に組み込まれる）。ヒト免疫グロブリン遺伝子およびｃＤＮＡの公開された配列とクローン化した核酸の配列を比較することによって、当業者は、配列決定された領域に応じて、（ｉ）ハイブリドーマ免疫グロブリンポリペプチド（重鎖のアイソタイプを含む）の生殖系セグメント使用法および（ｉｉ）Ｎ領域付加および体細胞変異のプロセスから生じる配列を含む、重鎖および軽鎖の可変領域の配列を容易に決定することができるであろう。免疫グロブリン遺伝子配列情報の１つの供給源は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄである。]
[0065] 本明細書で使用する、「単離された」核酸分子または「単離された」核酸配列は、（１）核酸の自然源に通常関連する少なくとも１つの汚染された核酸分子から同定および分離されるか、あるいは（２）対象の核酸の配列を決定することができるように、クローン化、増幅、標識化、または他の方法で、バックグラウンド核酸と区別されるかのいずれかである、核酸分子である。単離された核酸分子は、自然に見出される形態または設定以外のものである。しかしながら、単離された核酸分子には、例えば、核酸分子が、自然細胞のものとは異なる染色体位置にある、抗体を通常発現する細胞内に含有する核酸分子が含まれる。]
[0066] 単離されると、ＤＮＡは、発現制御配列に作用可能に連結され得るか、または発現ベクターに設置され得、その後、それは、そうでなければ、免疫グロブリンタンパク質を産生しないであろう宿主細胞内に形質転換され、組換え宿主細胞内のモノクローナル抗体の合成を誘導する。抗体の組換え産生は、当該技術分野において公知である。]
[0067] 発現制御配列とは、特定の宿主生物における作用可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に好適である制御配列は、例えば、プロモータ、任意に、オペレータ配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモータ、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを利用することが知られている。]
[0068] 核酸は、別の核酸配列と機能的な関係に置かれるとき、作用可能に連結される。例えば、プレ配列または分泌リーダーについてのＤＮＡが、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合には、そのポリペプチドについてのＤＮＡに作用可能に連結されており、プロモータまたはエンハンサーがコード配列の転写に影響を及ぼす場合には、その配列に作用可能に連結されており、またはリボソーム結合部位が、それが翻訳を助長するように配置されている場合には、コード配列に作用可能に連結されている。一般に、作用可能に連結されるとは、結合されるＤＮＡ配列が隣接しており、分泌リーダーの場合には隣接していると共に読み込み相（ｒｅａｄｉｎｇ ｐｈａｓｅ）にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、隣接している必要がない。連結は、従来の制限酵素認識部位でのライゲーションによって達成される。そうした部位が存在しない場合には、従来の施行に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを使用する。]
[0069] 多くのベクターが、当該技術分野において知られている。ベクター成分は、以下のうちの１つ以上を含み得る。シグナル配列（例えば、抗体の分泌を誘導し得る）、複製起点、１つ以上の選択的マーカー遺伝子（例えば、抗生物質または他の薬物耐性を付与する、補体栄養要求性欠損、または培地からは利用できない重要な栄養素を供給する）、エンヘンサー要素、プロモータ、および転写終結配列。これらのすべては、当該技術分野において公知である。]
[0070] 細胞、細胞株、および細胞培養物は、しばしば、交換可能に使用され、本明細書のすべてのかかる意味は、後代を含む。形質転換体および形質転換細胞には、転写の数に関係なくそれらに由来する一次対象細胞および培養物が含まれる。また、故意または偶発的な突然変異により、すべての後代においてＤＮＡの内容が正確に同一であるというわけではないことも理解されよう。当初の形質転換細胞でスクリーニングされたような、同じ機能または生物学的活性を有する変異体後代が含まれる。]
[0071] 例示的な宿主細胞には、原核生物、酵母菌、または高等真核細胞（即ち、多細胞生物）が含まれる。原核生物の宿主細胞には、グラム陰性またはグラム陽性生物等の真正細菌、例えば、エシェリキア属（例えば、大腸菌）、エンテロバクター属、エルビニア菌属、クレブシエラ属、プロテウス属、サルモネラ菌（ネズミチフス菌）、セラチア族（例えば、セラチア・マルセッセンス）、およびシゲラ族、ならびにバチルススプティーリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびバチルスリケニホルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）等のバチルス、シュードモナス菌、ならびにストレプトミセスのような腸内細菌科が挙げられる。糸状菌または酵母菌等の真核生物は、組換えポリペプチドまたは抗体の好適なクローニングまたは発現宿主である。サッカロマイセス・セレヴィシエ、すなわち一般のパン酵母が、下等真核宿主微生物の中で最も一般的に使用される。しかしながら、ピチア属（例えば、ピチアパストリス（Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ））、シゾサッカロミセス・ポンベ；クルイベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ヤロウイア属；カンジダ属；トリコデルマリ−ゼイトリコデルマ・リ−ゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）；ニューロスポラクラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）；シュワニオマイセス・オクシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）等のシュワニオマイセス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）；および、糸状真菌（例えば、ニューロスポラ、ペニシリウム、トリポタラジウム（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ））、ならびにアスペルギルス宿主（アスペルギルス・ニダランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）およびアスペルギルス・ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ））のような、多くの他の属、種、および型が、一般的に入手可能であり、本明細書に有用である。]
[0072] グリコシル化ポリペプチドまたは抗体の発現のための宿主細胞は、多細胞生物に由来し得る。無脊椎動物細胞の例には、植物および昆虫細胞が含まれる。スポドプレラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（毛虫）、ネッタイシマカＡｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ（蚊）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（蚊）、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（ミバエ）、およびカイコ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）のような宿主からの多数のバクテリアウイルス株および変異体および対応する許容昆虫宿主細胞を特定されている。例えば、オートグラファ・カリホルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ＮＰＶのＬ−１変異体およびカイコ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）ＮＰＶのＢｍ−５変異体のかかる細胞のトランスフェクションに関する種々のウイルス株が、公的に入手可能である。]
[0073] 脊椎動物宿主細胞もまた、好適な宿主であり、かかる細胞からのポリペプチドまたは抗体の組換え産生は、常法となっている。有用な哺乳動物宿主細胞系の例は、ＣＨＯＫ１細胞（ＡＴＣＣＣＣＬ６１）、ＤＸＢ−１１、ＤＧ−４４を含むチャイニーズハムスター卵巣細胞、およびチャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系（ＣＯＳ−７，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚腎臓系（２９３または懸濁培養での増殖用にサブクローンした２９３細胞、［Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）］；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；マウスセルトーリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６，ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒトヘパトーマ細胞（Ｈｅｐ Ｇ２，ＨＢ ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２，ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２））；ＭＲＣ ５細胞もしくはＦＳ４細胞；または哺乳動物骨髄腫細胞である。]
[0074] 宿主細胞を、抗体産生のために上記の核酸もしくはベクターを形質転換または形質移入し、プロモータを導入するか、形質転換細胞を選択するか、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために必要に応じて修飾された従来の培養液で培養する。加えて、選択マーカーによって分離された転写単位の複数の転写を有する新規ベクターおよび形質移入された細胞株は、抗体の発現に特に有用である。]
[0075] 本明細書に記載の抗体を産生するために使用される宿主細胞は、種々の培地中で培養され得る。Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）等の商業的に入手可能な培地が、宿主細胞を培養するのに好適である。加えて、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９），Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号、第４，６５７，８６６号、第４，９２７，７６２号、第４，５６０，６５５号、もしくは第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０１０３４３０、ＷＯ８７／００１９５、または米国再発行特許第３０，９８５号に記載される培地のいずれも、宿主細胞の培地として使用され得る。これら培地のいずれをも、ホルモン類および／または他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮増殖因子等）、塩類（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩等）、緩衝液（ＨＥＰＥＳ等）、ヌクレオシド類（アデノシンおよびチミジン等）、抗生物質（ゲンタマイシン（Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ）（商標）薬物等）、微量元素（ミクロモル範囲の最終濃度で通常存在する有機化合物として定義された）、およびグルコースまたは等価なエネルギー源で必要に応じて補ってもよい。他の必要ないずれの補助物もまた、当業者が知っているであろう適当な濃度で含ませ得る。温度、ｐＨ等の培養条件は、発現のために選択される宿主細胞に関して以前に用いたものであり、当業者には明らかであろう。]
[0076] 宿主細胞を培養すると、抗体が、ペリプラズムスペースにおいて、細胞内に産生されるか、培地に直接分泌され得る。抗体が細胞内に産生される場合、第１のステップとして、粒状破砕物、即ち、宿主細胞あるいは溶解フラグメントのいずれかを、例えば、遠心分離または超音波処理により除去する。]
[0077] 親和性リガンドとして対象の抗原もしくはタンパク質Ａもしくはタンパク質を用いて、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、カチオンもしくはアニオン交換クロマトグラフィ、または好ましくは親和性クロマトグラフィを用いて、抗体を精製することができる。タンパク質Ａを用いて、ヒトγ１、γ２、もしくはγ４重鎖に基づく抗体を精製することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１−１３（１９８３））。タンパク質Ｇは、すべてのマウスアイソタイプ用およびヒトγ３用に推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７１５７５（１９８６））。親和性リガンドが付着するマトリクスは、最も頻繁にはアガロースであるが、他のマトリクスも利用可能である。調整穴あきガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンのように機械的に安定なマトリクスは、アガロースを用いて達成し得るよりも速い流速と短い処理時間が可能になる。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合は、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカによるクロマトグラフィ、クロマト分画、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿のような他の技法も、回収しようとする抗体によっては利用できる。]
[0078] Ｂ．キメラ化およびヒト化抗体
キメラ化またはヒト化抗体は、親齧歯類モノクローナル抗体よりもヒトにおいて免疫原性が少ないため、それらは、過敏症の危険性がはるかに少ないヒトの治療のために使用することができる。したがって、これらの抗体は、ヒトへの生体内投与に関与する治療への適用に企図される。]
[0079] 例えば、単独あるいは複合体として、ヒトにおいて生体内投与を反復されるマウス抗体は、受容者において免疫応答、いわゆる、ＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗体）応答を生じる。ＨＡＭＡ応答は、反復投与が必要とされる場合、医薬品の有効性を制限し得る。抗体の免疫原性は、ポリエチレングリコール等の親水性ポリマーを用いた抗体の化学修飾によって、または抗体結合構造をよりヒト様にするための遺伝子工学の方法を用いることによって、低下させ得る。]
[0080] 本明細書で使用する「キメラ化抗体」という句は、一般的には、異なる種が起源である、２つの異なる抗体に由来する配列を含有する抗体を指す。最も一般的には、キメラ化抗体は、ヒト定常Ｉｇドメインに融合される齧歯類モノクローナル抗体の可変Ｉｇドメインを含む。かかる抗体は、当該技術分野において既知の標準手順を用いて生成することができる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｄｏｍａｉｎｓ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｒｅｇｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１，６８４１−６８５５、およびＢｏｕｌｉａｎｎｅ，Ｇ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３１２，６４３−６４６（１９８４）を参照のこと）。一部のキメラ化モノクローナル抗体は、ヒトにおいてより低い免疫原性を示すことが立証されているが、歯類可変Ｉｇドメインは、依然として、大幅なヒト抗−齧歯類反応を導き得る。]
[0081] 「ヒト化抗体」という句は、非ヒト抗体、一般的には、齧歯類モノクローナル抗体に由来する抗体を指す。代替として、ヒト化抗体は、キメラ化抗体に由来し得る。]
[0082] ヒト化抗体は、例えば、（１）非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）をヒトフレームワーク及び定常領域に移植すること（当該技術分野で「ヒト化する」と称される工程）、または代替的に、（２）非ヒト可変ドメイン全体を移植するが、表面残基の置換によってそれらをヒト様表面で「偽装」すること（当該技術分野で「ベニアリング」と称される工程）を含む、種々の方法によって達成され得る。これらの方法は、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２ ５２５（１９８６）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１：６８５１ ６８５５（１９８４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｏｉ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４：６５−９２（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−１５３６（１９８８）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．２８：４８９−４９８（１９９１）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１（３）：１６９ ２１７（１９９４）、およびＫｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．４（７）：７７３−８３（１９９１）に開示され、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。]
[0083] ＣＤＲ移植は、ヒト可変Ｉｇドメインの適切なフレームワーク領域にマウス重鎖および軽鎖可変Ｉｇドメインから６つのＣＤＲのうちの１つ以上を導入するステップを含む。この技法（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２，３２３（１９８８））は、抗原との一次的接触であるＣＤＲループを支えるための足場として、保存されたフレームワーク領域（ＦＲ１〜ＦＲ４）を利用する。ＣＤＲ移植の重大な難点は、しかしながら、フレームワーク領域のアミノ酸が抗原結合に寄与し得ること、およびＣＤＲループのアミノ酸が２つの可変Ｉｇドメインの結合に影響を及ぼし得るということが理由で、元のマウス抗体よりも実質的に低い結合親和性を有するヒト化抗体を生じ得ることである。ヒト化モノクローナル抗体の親和性を維持するために、ＣＤＲ移植技法は、元のマウス抗体のフレームワーク領域に最も密接に類似するヒトフレームワーク領域を選択することによって、および抗原結合部位のコンピュータモデリングの支援による、フレームワークまたはＣＤＲ内の単一アミノ酸部位指定突然変異誘発によって、改善できる（例えば、Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２，２９６８−２９７６）。]
[0084] 抗体をヒト化する１つの方法は、ヒト重鎖および軽鎖配列に対して非ヒト重鎖および軽鎖配列を整列させ、このようなアラインメントに基づいて非ヒトフレームワークを選択し、ヒトフレームワークで置き換え、ヒト化配列の立体配座を予測するために分子モデリングし、親抗体の立体配座と比較することを含む。この工程に続いて、ヒト化配列の予測された立体配座が、親非ヒト抗体の非ヒトＣＤＲの立体配座に密接に近づくまで、ＣＤＲの構造を乱すＣＤＲ領域内の残基の復帰変異を反復する。かかるヒト化抗体は、アシュウェル受容体（Ａｓｈｗｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を介して取り込みおよびクリアランスを助長するようにさらに誘導体化され得る（例えば、米国特許第 ５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号を参照のこと）。]
[0085] 合理的設計によるマウスモノクローナル抗体の多くのヒト化が、報告されている（例えば、２００２年７月１１日に公開された第２００２００９１２４０号、ＷＯ９２／１１０１８および米国特許第５，６９３，７６２号、米国特許第５，７６６，８６６号を参照のこと）。]
[0086] Ｃ．ヒト改変（Ｈｕｍａｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ（商標））抗体
「ヒト改変（Ｈｕｍａｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ（商標））抗体」という句は、非ヒト抗体、一般的に、齧歯類モノクローナル抗体またはあるいは、キメラ化抗体に由来する抗体を指す。抗体可変ドメインのヒト改変（Ｈｕｍａｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ（商標））は、抗体分子の結合活性を維持しながら、免疫原性を低下させる方法として、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａによって記載されている（例えば、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．米国特許第５，７６６，８８６号、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８０５−８１４，１９９４を参照のこと）。該方法によると、各可変領域アミノ酸は、置換の危険度が割り当てられる。アミノ酸置換は、３つの危険度カテゴリーの１つによって識別される：（１）低危険度変化は、免疫原性を低下させる最大の潜在的可能性を有し、抗原結合を妨げる可能性が最も低いものである、（２）中危険度変化は、免疫原性をさらに低下させるが、抗原結合またはタンパク質の折り畳みに影響を及ぼす可能性がより大きいものである、（３）高危険度残基は、抗体構造に結合するまたは抗体構造を維持するために重要であり、抗原結合またはタンパク質の折り畳みが影響を受ける危険度が最も高いものである。プロリンの三次元構造上の役割のゆえに、プロリンにおける修飾は、その位置が一般的には低危険度位置である場合でも、一般に少なくとも中危険度変化とみなされる。]
[0087] 齧歯類抗体の軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合またはタンパク質の折り畳みに有害な作用を及ぼす可能性が低いが、ヒト環境において免疫原性を低下させる可能性が高いと決定された位置で、ヒトアミノ酸を置換するために以下のようにヒト改変（Ｈｕｍａｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ（商標））され得る。個別のＶＨもしくはＶＬ配列、またはヒトコンセンサスＶＨもしくはＶＬ配列、または個別の、もしくはコンセンサスヒト生殖細胞系配列を含む、いかなるヒト可変領域も使用できるが、一般に、齧歯類配列に対して最も高い同一性もしくは相同を有するヒト配列を使用して、多数の置換を最小化する。どのような数の低危険度位置、またはすべての低危険度位置のアミノ酸残基も変化させることができる。例えば、整列したネズミとヒトアミノ酸残基が異なる各々の低危険度位置で、齧歯類残基をヒト残基で置換するアミノ酸修飾を導入する。加えて、どのような数の、またはすべての中危険度位置のアミノ酸残基も変化させることができる。例示的な実施形態において、すべての低および中危険度位置は、齧歯類配列からヒト配列に変化する。]
[0088] 修飾重鎖および／または軽鎖可変領域を含む合成遺伝子を構築し、ヒトγ重鎖および／またはκ軽鎖定常領域に連結する。任意のクラスまたはサブクラスの任意のヒト重鎖および軽鎖は、ヒト改変（Ｈｕｍａｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ（商標））抗体可変領域と組み合わせて使用し得る。]
[0089] Ｄ．ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むように改変されたトランスジェニック動物からの抗体
フェロポーチンに対する抗体はまた、内因性免疫グロブリンを産生せず、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むように改変されたトランスジェニック動物を用いて、産生することもできる。例えば、ＷＯ９８／２４８９３は、ヒトＩｇ遺伝子座を有するトランスジェニック動物を開示しており、該動物は、内因性重鎖および軽鎖遺伝子座の不活性のために機能性内因性免疫グロブリンを産生しない。ＷＯ９１／７４１もまた、免疫原に対する免疫応答を開始させることができるトランスジェニック非霊長類哺乳動物宿主を開示しており、該抗体は、霊長類定常および／または可変領域を有し、内因性免疫グロブリンをコードする遺伝子座は置換または不活性化されている。ＷＯ９６／３０４９８は、修飾抗体分子を形成するために定常または可変領域の全部または一部を置換することのような、哺乳動物における免疫グロブリン遺伝子座を修飾するためのＣｒｅ／Ｌｏｘ系の使用を開示する。ＷＯ９４／０２６０２は、不活性化内因性Ｉｇ遺伝子座および機能的ヒトＩｇ遺伝子を有する非ヒト哺乳動物宿主を開示する。米国特許第５，９３９，５９８号は、マウスが内因性重鎖を欠き、１つ以上の異種定常領域を含む外来性免疫グロブリン遺伝子座を発現するトランスジェニックマウスを作製する方法を開示する。]
[0090] 上述したトランスジェニック動物を用いて、選択抗原分子に対する免疫応答を産生することができ、抗体産生細胞を動物から取り出して、ヒト由来モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを産生するために使用することができる。免疫プロトコール、アジュバント等は当該技術分野において知られており、例えば、ＷＯ９６／３３７３５に記載されるように、トランスジェニックマウスの免疫において使用される。モノクローナル抗体、対応するタンパク質の生物学的活性または生理的作用を阻害するまたは中和する能力に関して試験することができる。]
[0091] Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）、および米国特許第５，５９１，６６９号、米国特許第５，５８９，３６９号、米国特許第５，５４５，８０７号、ならびに米国特許出願第２００２０１９９２１３号も参照のこと。米国特許出願第２００３００９２１２５号は、所望のエピトープに対する動物の免疫応答にバイアスをかけるための方法を記載している。ヒト抗体はまた、体外活性化Ｂ細胞によって生成され得る（米国特許第５，５６７，６１０号および第５，２２９，２７５号を参照のこと）。]
[0092] Ｅ．ファージディスプレイによって産生される抗体
組換えヒト抗体遺伝子のレパートリーを作製するための技術の開発、および糸状バクテリオファージの表面上でのコードされる抗体フラグメントの提示は、ヒト由来抗体を生成するための別の手段を提供している。ファージディスプレイは、例えば、Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．、ＷＯ９１／１７２７１、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．、ＷＯ９２／０１０４７、およびＣａｔｏｎ ａｎｄ Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６４５０−６４５４（１９９０）に記載され、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ファージ技術によって産生される抗体は、通常、細菌において抗原結合フラグメント、例えば、ＦｖまたはＦａｂフラグメントとして産生され、したがって、エフェクター機能を欠く。エフェクター機能は、２つの戦略のいずれかによって導入することができる。すなわち、フラグメントを、哺乳動物細胞における発現のために完全抗体に改変するか、またはエフェクター機能誘発することが可能な第２の結合部位を備えた二重特異性抗体フラグメントに改変することができる。]
[0093] 一般的には、抗体のＦｄフラグメント（ＶＨ−ＣＨ１）および軽鎖（ＶＬ−ＣＬ）を、ＰＣＲによって別々にクローニングし、コンビナトリアルファージディスプレイライブラリーにおいて無作為に組換えて、次にそれらを特定抗原への結合に関して選択することができる。抗体フラグメントは、ファージ表面上で発現され、抗原結合によるＦｖまたはＦａｂ（したがって、抗体フラグメントをコードするＤＮＡを含むファージ）の選択は、パニングと称される工程である、数回の抗原結合と再増幅によって達成される。抗原に特異的な抗体フラグメントを富化し、最終的に単離する。]
[0094] ファージディスプレイはまた、「ガイド選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」と呼ばれる齧歯類モノクローナル抗体のヒト化のためのアプローチにも使用することができる（Ｊｅｓｐｅｒｓ，Ｌ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２，８９９−９０３（１９９４）を参照のこと）。このために、マウスモノクローナル抗体のＦｄフラグメントを、ヒト軽鎖ライブラリーと組み合わせて提示することができ、次いで、得られたハイブリッドＦａｂライブラリーを、抗原で選択してもよい。マウスＦｄフラグメントは、それによって、選択を導く（ガイドする）ための鋳型を提供する。その後、選択したヒト軽鎖を、ヒトＦｄフラグメントライブラリーと組み合わせる。得られたライブラリーの選択は、完全なヒトＦａｂを産出する。]
[0095] ファージディスプレイライブラリーからヒト抗体を誘導するための種々の手順が記述されている（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２２：５８１−５９７（１９９１）、米国特許第５，５６５，３３２号および第５，５７３，９０５号、Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．，ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ，Ｊ．Ａ．，ＴＩＢＴＥＣＨ １２，１７３−１８４（１９９４）を参照のこと）。特に、ファージディスプレイライブラリーに由来する抗体の体外選択と進化は、強力なツールとなっている（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．， ａｎｄ Ｂａｒｂａｓ ＩＩＩ，Ｃ．Ｆ．，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５７，１９１−２８０（１９９４）、およびＷｉｎｔｅｒ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２，４３３−４５５（１９９４）、米国特許出願第２００２０００４２１５号およびＷＯ９２／０１０４７、２００３年１０月９日に公開された米国特許出願第２００３０１９０３１７号、ならびに米国特許第６，０５４，２８７号、米国特許第５，８７７，２９号を参照のこと）。]
[0096] Ｗａｔｋｉｎｓ，“Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｐｈａｇｅ−Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ｂｙ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｌｉｆｔ，” Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ １７８：１８７−１９３、および２００３年３月６日に公開された米国特許出願公開第２００３００４４７７２号は、固体支持体への候補結合分子の固定化を含む方法である捕捉リフト（ｃａｐｔｕｒｅ ｌｉｆｔ）によって、ファージ発現された抗体ライブラリーまたは他の結合分子をスクリーニングするための方法を記載する。]
[0097] Ｆ．抗体フラグメント
上記のように、抗体フラグメントは、無傷全長抗体の一部分、好ましくは、無傷抗体の抗原結合もしくは可変領域を含み、抗体フラグメントから形成される線状抗体および多重特異性抗体を含む。抗体フラグメントの限定されない例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、相補的決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体フラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、線状抗体、キメラ化組換え抗体、トリボディもしくはバイボディ、細胞内抗体、ナノボディ、小モジュール免疫薬剤（ＳＭＩＰ）、抗原結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質、ラクダ化抗体、ＶＨＨ含有抗体、またはこれらの変異タンパク質もしくは誘導体、ならびに抗体が、所望の生物学的活性を保持する限り、ＣＤＲ配列等のポリペプチドに結合する特異性抗原を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部分を含有するポリペプチドが含まれる。かかる抗原フラグメントは、全抗体の修正によって産生され得るか、または組換えＤＮＡ技法またはペプチド合成を用いて新たに合成され得る。]
[0098] 「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を持つ小さい抗体フラグメントを指し、そのフラグメントは、同一のポリペプチド鎖（ＶＨ ＶＬ）内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同一の鎖上で２つのドメイン間の対を形成させるには非常に短すぎるリンカーを用いることによって、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインと強制的に対形成させ、２つの抗原結合部位を創製する。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）に更に詳細に記載されている。]
[0099] 「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、ここで、これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖に存在し、および任意に、Ｆｖが、抗原結合に対して所望の構造を形成することが可能な、ＶＨおよびＶＬドメインの間のポリペプチドリンカーを含む（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３−４２６，１９８８、およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：５８７９−５８８３，１９８８）。Ｆｄフラグメントは、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる。]
[0100] 追加の抗体フラグメントには、ＶＨドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）フラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：５４４−５４６，１９８９）を含む。]
[0101] 「線状抗体」は、一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。線状抗体は、二重特異性または単一特異性であり得る（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８：１０５７−６２（１９９５））。]
[0102] ペプチドリンカー（ヒンジなし）を介してまたはＩｇＧヒンジを介してＣＨ３に融合されるｓｃＦｖからなる「ミニボディ」は、Ｏｌａｆｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２００４ Ａｐｒ；１７（４）：３１５−２３に記載されている。]
[0103] 「マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）」という用語は、免疫グロブリンのＦｃ領域に共有結合している二価のｓｃＦｖを指し、例えば、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋｓ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，１７：９５−１０６（２００４）およびＰｏｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２５１：１２３−１３５（２００１）を参照のこと。]
[0104] 軽鎖を欠いている機能的重鎖抗体は、ある種の動物（テンジクザメ、アラフラオオセ（ｗｏｂｂｅｇｏｎｇ ｓｈａｒｋ）、ならびにラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、アルパカおよびラマ等））において、自然発生する。抗原結合部位は、これらの動物において、単一ドメインである、ＶＨＨドメインのみとなる。これらの抗体は、重鎖可変領域のみを用いて、抗原結合部位を形成する、即ち、これらの機能的抗体は、構造Ｈ２Ｌ２のみを有する重鎖のホモ二量体である（「重鎖抗体」または「ＨＣＡｂｓ」と称する）。ラクダ化ＶＨＨは、報告によれば、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインを含み、ＣＨ１ドメインを欠くＩｇＧ２およびＩｇＧ３定常領域と再結合する。古典的なＶＨのみのフラグメントは、可溶性形態で産生することが難しいが、フレームワーク残基をよりＶＨＨ様に変化させると、溶解度の改善と特異的結合が得られ得る（例えば、Ｒｅｉｃｈｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９９，２３１：２５−３８を参照のこと）。ラクダ化ＶＨＨドメインは、高親和性で抗原に結合し（Ｄｅｓｍｙｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−９０，２００１）、溶液中で高い安定性を有する（Ｅｗｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４１：３６２８−３６，２００２）ことが見出されている。ラクダ化重鎖を有する抗体を作製するための方法は、例えば、米国特許公開第２００５０１３６０４９号および第２００５００３７４２１号に記載されている。代替的な足場は、サメＶ−ＮＡＲ足場にさらに厳密に適合するヒト可変様ドメインから作製され得、長い貫通ループ構造のためにフレームワークを提供し得る。]
[0105] 重鎖抗体の可変ドメインは、１５ｋＤａのみの分子量を有する最小の完全に機能する抗原結合フラグメントであるため、この実体は、ナノボディと称される（Ｃｏｒｔｅｚ−Ｒｅｔａｍｏｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４：２８５３−５７，２００４）。ナノボディライブラリーは、Ｃｏｎｒａｔｈ ｅｔ ａｌ．，（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ４５：２８０７−１２，２００１）に記載されているように免疫ヒトコブラクダから作製し得る（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，４５：２８０７−１２，２００１）。]
[0106] 細胞内抗体は、細胞内発現を示し、細胞内タンパク質機能を操作することができる単鎖抗体である（Ｂｉｏｃｃａ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，９：１０１−１０８，１９９０、Ｃｏｌｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．，１０１：１７６１６−２１，２００４）。細胞領域内に抗体構築物を保持する細胞シグナル配列を含む、細胞内抗体は、Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒ ｅｔ ａｌ．（ＥＭＢＯ Ｊ １４：１５４２−５１，１９９５）およびＷｈｅｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（ＦＡＳＥＢ Ｊ．１７：１７３３−５．２００３）に記載されているように産生され得る。トランスボディは、タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）が単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）と融合している細胞透過性抗体である（Ｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．，６４：１１０５−８，２００５）。]
[0107] さらに、ＳＭＩＰまたは標的タンパク質に特異的な結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である抗体が企図される。これらの構築物は、抗体のエフェクター機能を実行するために必要な免疫グロブリンドメインに融合した抗原結合ドメインを含む単鎖ポリペプチドである。例えば、ＷＯ０３／０４１６００、米国特許公開第２００３０１３３９３９号および米国特許公開第２００３０１１８５９２号を参照のこと。]
[0108] Ｇ．多価抗体
いくつかの実施形態において、多価またはさらに多重特異性（例えば、二重特異性、三重特異性等）モノクローナル抗体を生成することが望ましいとされ得る。かかる抗体は、標的抗原の少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有し得る、または代替として、２つの異なる分子、例えば、標的抗原および細胞表面タンパク質もしくは受容体に結合し得る。例えば、二重特異性抗体は、細胞防御機構を標的発現細胞に集中させるために、標的に結合する腕と、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２またはＣＤ３）等の白血球上の引き金分子、またはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）等のＩｇＧ（ＦｃγＲ）についてのＦｃ受容体に結合する別の腕を含み得る。別の例として、二重特異性抗体は、細胞傷害性薬を、標的抗原を発現する細胞に局在化させるために使用し得る。これらの抗体は、標的結合腕と、細胞傷害性薬（例えば、サポリン、抗インターフェロン６０、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサートまたは放射性同位体ハプテン）に結合する腕を有する。多重特異性抗体は、完全長抗体または抗体フラグメントとして調製され得る。]
[0109] さらに、本明細書に開示される抗フェロポーチン抗体はまた、多価形態に折り畳むように構築され得、それらは、結合親和性、特異性および／または血液中の半減期の増加を改善し得る。抗フェロポーチン抗体の多価形態は、当該技術分野において既知の技法によって調製することができる。]
[0110] 二重特異性または多重特異性抗体には、架橋された抗体または「ヘテロ複合」抗体が含まれる。例えば、ヘテロ複合体中の抗体の１つをアビジンに結合し、他方をビオチンに結合することができる。ヘテロ複合体は、何らかの好都合な架橋法を用いて作製し得る。好適な架橋剤は、当該技術分野において公知であり、米国特許第４，６７６，９８０号の中で数多くの架橋手法と共に開示されている。別の方法は、ｓｃＦｖのＣ末端でストレプトアビジンをコードする配列を加えることによって、四量体を作製するように設計される。ストレプトアビジンは、４つのサブユニットからなり、ｓｃＦｖストレプトアビジンが折り畳まれた際、４つのサブユニットは、四量体を形成するように会合する（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ６（３）：９３−１０１（１９９５）、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。]
[0111] 二重特異性抗体を作製するための別のアプローチに従うと、１組の抗体分子の間の界面を、改変して、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体のパーセンテージを最大化することができる。１つの界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面からの１つ以上の小さなアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置換する。第２の抗体分子の界面では、大きなアミノ酸側鎖をより小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはトレオニン）で置換することにより、大きな側鎖と同一または類似の大きさの補償的な「腔」が創製される。これは、ホモ二量体等の他の望ましくない最終産物を上回って、テロ二量体の収率を上昇させるための機構を提供する。１９９６年９月６日に公開されたＷＯ９６／２７０１１を参照のこと。]
[0112] 抗体フラグメントからの二重特異性または多重特異性抗体を生成するための技法も、文献に記載されている。例えば、二重特異性または多重特異性抗体は、化学結合を用いて調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１（１９８５）は、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを生成するために無傷抗体をタンパク質分解によって切断する手順を記載している。これらのフラグメントを、近接ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を防ぐためにジチオール錯化剤、亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元する。生成されたＦａｂ’フラグメントを、次いで、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換する。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つを、メルカプトエチルアミンで還元してＦａｂ’チオールに再変換し、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合して二重特異性抗体を形成する。産生された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための試薬として使用することができる。Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３（１９８８）は、細菌からの機能的抗体フラグメントの分泌を開示する（例えば、Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８−１０４１（１９８８）を参照のこと）。例えば、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを、大腸菌から直接回収することができ、それを化学的に結合して、二重特異性抗体を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３−１６７（１９９２）、Ｓｈａｌａｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２））。]
[0113] Ｓｈａｌａｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全ヒト化二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生を記載している。各々のＦａｂ’フラグメントを、大腸菌から別々に分泌させ、体外で指向性化学結合に供して、二重特異性抗体を形成した。そのようにして形成された二重特異性抗体は、ＨＥＲ２受容体を過剰発現する細胞および正常ヒトＴ細胞に結合することができ、ならびにヒト乳癌標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘起することができた。]
[0114] 組換え細胞培養物から直接二重特異性または多重特異性抗体フラグメントを作製し、単離するための種々の技法も記載されている。例えば、ＧＣＮ４等のロイシンジッパーを用いて二重特異性抗体が産生されている（一般に、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３，１９９２を参照のこと）。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結した。抗体ホモ二量体を、ヒンジ領域で還元して単量体を形成し、その後、再酸化して抗体へテロ二量体を形成した。この方法はまた、抗体ホモ二量体の産生のためにも利用することができる。]
[0115] 上記のダイアボディは、二重特異性抗体の一例である。例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと。二価ダイアボディは、ジスルフィド連結によって安定化され得る。]
[0116] 安定な単一特異性または二重特異性Ｆｖ四量体はまた、（ｓｃＦｖ２）２配置で、またはビス−テトラボディとして、非共有結合性会合によって生成され得る。代替として、２つの異なるｓｃＦｖを、縦列に接合して、ビス−ｓｃＦｖを形成することができる。]
[0117] 単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用によって二重特異性抗体フラグメントを作製するための別の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。１つのアプローチは、リンカーまたはジスルフィド結合で２つのｓｃＦｖ抗体を連結させている（Ｍａｌｌｅｎｄｅｒ ａｎｄ Ｖｏｓｓ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１９９−２０６１９９４、ＷＯ９４／１３８０６および米国特許第５，９８９，８３０号、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。]
[0118] 代替として、二重特異性抗体は、Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）に記載されるように生成される、「線状抗体」であり得る。簡潔に述べると、これらの抗体は、一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。線状抗体は、二重特異性または単一特異性であり得る。]
[0119] ２つ以上の価数を有する抗体はまた、企図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる（Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１））。]
[0120] 「キレート組換え抗体」は、標的抗原の近接および非重複エピトープを認識する二重特異性抗体であり、両方のエピトープに同時に結合するのに十分なだけ柔軟である（Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２４６：３６７−７３，１９９５）。]
[0121] 二重特異性Ｆａｂ−ｓｃＦｖ（「バイボディ」）および三重特異性Ｆａｂ−（ｓｃＦｖ）（２）（「トリボディ」）の産生は、Ｓｃｈｏｏｎｊａｎｓら（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６５：７０５０−５７，２０００）およびＷｉｌｌｅｍｓら（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ．Ａｎａｌｙｔ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．，７８６：１６１−７６，２００３）に記載されている。バイボディまたはトリボディに関しては、ｓｃＦｖ分子をＶＬ−ＣＬ（Ｌ）およびＶＨ−ＣＨ１（Ｆｄ）鎖の片方または両方に融合するが、例えば、バイボディにおいては、１つのｓｃＦｖをＦａｂのＣ末端に融合する一方、トリボディを産生するためには、２つのｓｃＦｖをＦａｂのＣ末端に融合する。]
[0122] さらに別の方法において、二量体、三量体、および四量体は、遊離システインが、親タンパク質に導入された後、産生される。様々な数（２〜４）のマレイミド基を有するペプチド系架橋を使用して、該当するタンパク質を遊離システインに架橋させた（Ｃｏｃｈｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １２（３）：２４１−５０（２０００）、これらの開示は、その全体が本明細書に組み込まれる）。]
[0123] ＩＩ．特異的結合剤
他のフェロポーチン特異的結合剤は、例えば、抗体からのＣＤＲに基づいて、またはヒトフェロポーチンについて所望の結合特性を示すペプチドもしくは化合物のために、種々のペプチドもしくは有機化学化合物のライブラリーをスクリーニングすることによって、調製することができる。フェロポーチン特異的結合剤には、ヒト抗体３１Ａ５（配列番号５〜１０）、ヒト抗体３７Ａ２（配列番号２９〜３４）、ヒト抗体３７Ｂ９（配列番号３９〜４４）、ヒト抗体３７Ｃ８（配列番号４９〜５４）、ヒト抗体３７Ｇ８（配列番号５９〜６４）、ヒト抗体３８Ａ４（配列番号６９〜７４）、ヒト抗体３８Ｃ８（配列番号７９〜８４）、ヒト抗体３８Ｄ２（配列番号８９〜９４）、ヒト抗体３８Ｅ３（配列番号９９〜１０４）、またはヒト抗体３８Ｇ６（配列番号１０９〜１１４）のうちの１つ以上のＣＤＲに、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一である、ペプチド含有アミノ酸配列が含まれる。]
[0124] また、フェロポーチン特異性結合剤には、ペプチボディも含まれる。「ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、少なくとも１つのペプチドに付着された抗体Ｆｃドメインを含む分子を指す。ペプチボディの産生は、２０００年５月４日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ００／２４７８２に概説されている。これらのペプチドのいずれも、リンカーによるか、またはリンカーによらずに、縦列に（即ち、連続的に）連結され得る。システイニル残基を含有するペプチドは、別のＣｙｓ含有ペプチドと架橋され得、これらのいずれか、またはその両方は、ビヒクルに連結され得る。１つ以上のＣｙｓ残基を有するいかなるペプチドも、ペプチド内ジスルフィド結合も形成し得る。これらのペプチドのいずれも、誘導体化され得る、例えば、カルボキシル末端は、アミノ基でキャップされ得るか、システインは、アミノ酸残基以外の部分によって、キャップされ得るか、またはアミノ酸残基は、アミノ酸残基以外の部分によって、置換され得る（例えば、Ｂｈａｔｎａｇａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：３８１４−９（１９９６）、およびＣｕｔｈｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：２８７６−８２（１９９７）を参照されたく、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。抗体のための親和性成熟に類似する手法でペプチド配列を、最適化し得る、またはそうでなければ、アラニンスキャニング（ａｌａｎｉｎｅ ｓｃａｎｎｉｎｇ）もしくはランダムもしくは定方向突然変異誘発によって変更し、次いで、最良の結合剤を特定するためにスクリーニングすることができる（Ｌｏｗｍａｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．，２６：４０１−２４，１９９７）。種々の分子は、特異的結合剤の所望の活性を保持しながら、特異的結合剤構造、例えば、それ自体のペプチド部分内、または特異的結合剤のペプチドとビヒクル部分の間に挿入され得る。例えば、Ｆｃドメインもしくはそのフラグメント等の分子、ポリエチレングリコール、またはデキストラン、脂肪酸、脂質、コレステロール基、小炭水化物、ペプチド、本明細書に記載されるような検出可能な部分（蛍光剤、放射性同位体等の放射標識を含む）、オリゴ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、干渉（もしくは他の）ＲＮＡ、酵素、ホルモン、もしくは相当物等の他の関連した分子を容易に挿入することができる。このような方法において挿入のために好適な他の分子は、当業者により理解され、本発明の範囲内に包含される。これには、例えば、２つの連続したアミノ酸の間にある、任意に、好適なリンカーによって接合される、所望の分子の挿入が含まれる。]
[0125] フェロポーチンペプチボディの開発も企図される。タンパク質リガンドのその受容体との相互作用は、しばしば、相対的に大きな界面において起こる。しかしながら、ヒト成長ホルモンとその受容体で示されるように、界面におけるほんの少数の重要な残基が結合エネルギーの大部分に寄与している。（Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６７：３８３−６，１９９５）。タンパク質リガンドの大半は、単に正しいトポロジーで結合エピトープを提示するか、もしくは結合には関係しない機能として働く。したがって、「ペプチド」の長さ（一般に、２〜４０個のアミノ酸）の分子だけが所与の大きなタンパク質リガンドの受容体タンパク質に結合することができる。かかるペプチドは、大タンパク質リガンドの生物活性を擬似するか（「ペプチド作動薬」）、または競合的結合を通して、大タンパク質リガンドの生物活性を阻害することができる（「ペプチド拮抗薬」）。]
[0126] ファージディスプレイ技術は、そのようなペプチド作動薬と拮抗薬を同定する強力な方法として出現している。例えば、Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６（１９９０）、Ｄｅｖｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４（１９９０）、１９９３年６月２９日に発行された米国特許第５，２２３，４０９号、１９９８年３月３１日に発行された米国特許第５，７３３，７３１号、１９９６年３月１２日に発行された米国特許第５，４９８，５３０号、１９９５年７月１１日に発行された米国特許第５，４３２，０１８号、１９９４年８月１６日に発行された米国特許第５，３３８，６６５号、１９９９年７月１３日に発行された米国特許第５，９２２，５４５号、１９９６年１２月１９日に公開されたＷＯ９６／４０９８７、および１９９８年４月１６日に公開されたＷＯ９８／１５８３３を参照のこと（これらのそれぞれは、参照によりその全体が組み込まれる）。ペプチドファージディスプレイライブラリーにおいて、ランダムペプチド配列は、糸状ファージのコートタンパク質との融合によって提示され得る。提示されたペプチドを、必要に応じて、受容体の抗体固定化された細胞外ドメインに対して親和性溶出することができる。残留したファージは、親和性精製および再増殖を連続的に繰り返すことによって富化され得る。最良の結合ペプチドを配列決定して、ペプチドの１つ以上の構造的に関連するファミリー内の重要な残基を同定することができる。例えば、Ｃｗｉｒｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：１６９６−９（１９９７）を参照のこと。、ここでは、２つの異なるファミリーが同定された。ペプチド配列はまた、どの残基がアラニンスキャニングによって、またはＤＮＡレベルでの変異誘発によって安全に置換できるかを示唆し得る。突然変異誘発ライブラリーを創造し、スクリーニングして、最良の結合剤の配列をさらに最適化してもよい。（Ｌｏｗｍａｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．，２６：４０１−２４，１９９７）。]
[0127] タンパク質−タンパク質相互作用の構造分析も、大タンパク質リガンドの結合活性を擬似するペプチドを示唆するために使用し得る。このような分析において、結晶構造は、ペプチドが設計され得る大タンパク質リガンドの決定的残基が何であるかの確認と相対的方向性を示唆し得る。例えば、Ｔａｋａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １５：１２６６−７０（１９９７）を参照のこと。これらの分析法は、結合親和性を高めるためのペプチドのさらなる修飾を示唆し得る、受容体タンパク質とファージディスプレイによって選択されたペプチド間の相互作用を検討するためにも使用してもよい。]
[0128] 他の方法は、ペプチド研究においてファージディスプレイと競合する。ペプチドライブラリーを、ｌａｃリプレッサーのカルボキシル末端に融合し、大腸菌において発現することができる。別の大腸菌に基づく方法は、ペプチドグリカン結合リポタンパク質（ＰＡＬ）との融合により細胞の外膜に発現させる。本文中以下では、これらおよび関連する方法を、集合的に「大腸菌ディスプレイ」と称する。別の方法において、ランダムＲＮＡの翻訳をリボソーム放出の前に停止させ、それらの関連ＲＮＡがまだ付着しているポリペプチドのライブラリーを生じさせる。本文中以下では、これおよび関連する方法を、集合的に「リボソームディスプレイ」と称する。他の方法は、ＲＮＡへのペプチドの化学結合を採用する。例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９４：１２２９７−３０３（１９９７）を参照のこと。本文中以下では、これおよび関連する方法を、集合的に「ＲＮＡ−ぺプチドスクリーニング」と称する。ペプチドがポリエチレンロッドまたは溶媒透過性樹脂のような安定な非生物学的物質上に固定されている、化学的に誘導されたペプチドライブラリーが開発されている。別の化学的に誘導されたペプチドライブラリーは、写真平板印刷を用いてガラススライド上に固定されたペプチドを走査する。本文中以下では、これらおよび関連する方法を、集合的に「化学物質−ぺプチドスクリーニング」と称する。化学物質−ぺプチドスクリーニングは、Ｄアミノ酸および他の非天然類似体、ならびに非ペプチド要素を使用できるという点で有利であると考えられる。生物学的方法と化学的方法の両方が、Ｗｅｌｌｓ ａｎｄ Ｌｏｗｍａｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３：３５５−６２（１９９２）の中で考察されている。]

权利要求:

請求項1
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合し、ならびにフェロポーチン活性を持続する単離された抗体。
請求項2
ヘプシジンの存在下でフェロポーチン活性を持続する、請求項１の抗体。
請求項3
フェリチンアッセイによって測定して、約１０−６Ｍ以下のＥＣ５０でフェリチン発現レベルを低下させる、請求項１の抗体。
請求項4
約１×１０−６Ｍ以下のＥＣ５０で、対象における細胞内鉄濃度を低下させる、請求項１の抗体。
請求項5
対象における血中鉄レベルまたはＴｓａｔを増加させる、請求項１の抗体。
請求項6
対象における、少なくともヘモグロビンもしくはヘマトクリットのうちの１つ、または双方のレベルを増加させる、請求項１の抗体。
請求項7
対象における、少なくとも赤血球数、赤血球数の赤血球ヘモグロビン含有量、もしくは赤血球数の赤血球平均細胞体積のうちの１つ、またはそれらの任意の組み合わせを増加させる、請求項１の抗体。
請求項8
対象における、少なくとも網状赤血球数、網状赤血球数の網状赤血球ヘモグロビン含有量、もしくは網状赤血球数の網状赤血球平均細胞体積のうちの１つ、またはそれらの任意の組み合わせを増加させる、請求項１の抗体。
請求項9
フェロポーチンの内部移行を阻害する、請求項１の抗体。
請求項10
フェロポーチンの分解を阻害する、請求項１の抗体。
請求項11
フェロポーチンのヘプシジン媒介の内部移行または分解を阻害する、請求項９または１０の抗体。
請求項12
フェロポーチンの細胞外ドメインは、配列番号１６のアミノ酸４６〜６０、１１６〜１２６、２０４〜２０５、３２５〜３４２、３９４〜４４９、５１３〜５１７、３５〜５７、１１６〜１２４、３３２〜３４０、３９３〜４４９および５１５〜５１８、ならびに少なくとも４アミノ酸長さのそのフラグメントからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１から１１のいずれかの抗体。
請求項13
モノクローナル抗体である、請求項１から１２のいずれかの抗体。
請求項14
配列番号５〜１０、配列番号２９〜３４、配列番号３９〜４４、配列番号４９〜５４、配列番号５９〜６４、配列番号６９〜７４、配列番号７９〜８４、配列番号８９〜９４、配列番号９９〜１０４、および配列番号１０９〜１１４からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、請求項１３の単離された抗体。
請求項15
１０−６Ｍ以下のＫｄで、フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する、単離されたモノクローナル抗体。
請求項16
ヒトフェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合し、かつ細胞鉄保持を阻害する、単離されたモノクローナル抗体。
請求項17
ヒトフェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合し、かつフェロポーチンの内部移行および／または分解を低下させる、単離されたモノクローナル抗体。
請求項18
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号２または４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号５〜１０からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含み、ならびにいずれのＣＤＲも、配列番号５〜１０のいずれかに対して少なくとも１つのアミノ酸変化を含む、抗体。
請求項19
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号２６または２８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号２９〜３４からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含み、ならびにいずれのＣＤＲも、配列番号２９〜３４のいずれかに対して少なくとも１つのアミノ酸変化を含む、抗体。
請求項20
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号３６または３８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号３９〜４４からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含み、ならびにいずれのＣＤＲも、配列番号３９〜４４のいずれかに対して少なくとも１つのアミノ酸変化を含む、抗体。
請求項21
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号４６または４８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号４９〜５４からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含み、ならびにいずれのＣＤＲも、配列番号４９〜５４のいずれかに対して少なくとも１つのアミノ酸変化を含む、抗体。
請求項22
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号５６または５８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号５９〜６４からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含み、ならびにいずれのＣＤＲも、配列番号５９〜６４のいずれかに対して少なくとも１つのアミノ酸変化を含む、抗体。
請求項23
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号６６または６８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号６９〜７４からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含み、ならびにいずれのＣＤＲも、配列番号６９〜７４のいずれかに対して少なくとも１つのアミノ酸変化を含む、抗体。
請求項24
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号７６または７８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号７９〜８４からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含み、ならびにいずれのＣＤＲも、配列番号７９〜８４のいずれかに対して少なくとも１つのアミノ酸変化を含む、抗体。
請求項25
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号８６または８８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号８９〜９４からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含み、ならびにいずれのＣＤＲも、配列番号８９〜９４のいずれかに対して少なくとも１つのアミノ酸変化を含む、抗体。
請求項26
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号９６または９８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号９９〜１０４からなる群から選択される少なくともＣＤＲを含み、ならびにいずれのＣＤＲも、配列番号９９〜１０４のいずれかに対して少なくとも１つのアミノ酸変化を含む、抗体。
請求項27
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号１０６または１０８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１０９〜１１４からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含み、ならびにいずれのＣＤＲも、配列番号１０９〜１１４のいずれかに対して少なくとも１つのアミノ酸変化を含む、抗体。
請求項28
重鎖および軽鎖を含む単離されたモノクローナル抗体であって、前記重鎖は、配列番号１４のアミノ酸１８〜４６６を含み、ならびに前記軽鎖は、配列番号１２のアミノ酸２１〜２３９を含む、抗体。
請求項29
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号２、配列番号２６、配列番号３６、配列番号４６、配列番号５６、配列番号６６、配列番号７６、配列番号８６、配列番号９６および配列番号１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、抗体。
請求項30
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号４、配列番号２８、配列番号３８、配列番号４８、配列番号５８、配列番号６８、配列番号７８、配列番号８８、配列番号９８および配列番号１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、抗体。
請求項31
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号２、配列番号２６、配列番号３６、配列番号４６、配列番号５６、配列番号６６、配列番号７６、配列番号８６、配列番号９６および配列番号１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、抗体。
請求項32
フェロポーチン（配列番号１６）の細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記抗体は、配列番号４、配列番号２８、配列番号３８、配列番号４８、配列番号５８、配列番号６８、配列番号７８、配列番号８８、配列番号９８および配列番号１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、抗体。
請求項33
配列番号１６のアミノ酸３９３〜４４９内に位置する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つもしくはそれ以上のアミノ酸を含む前記ヒトフェロポーチンのフラグメントに結合するか、または、または前記フラグメントの１つ以上のアミノ酸を含むヒトフェロポーチンのエピトープに結合する、請求項１から３２のうちの一項の単離された抗体。
請求項34
配列番号１６のアミノ酸３９３〜４４９内に位置する少なくとも１０もしくはそれ以上のアミノ酸を含む前記ヒトフェロポーチンのフラグメントに結合するか、または前記フラグメント内の、もしくは前記フラグメントのエピトープに結合する、請求項３３の単離された抗体。
請求項35
配列番号１６のアミノ酸４３９〜４４９内に位置する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つもしくはそれ以上のアミノ酸を含む前記ヒトフェロポーチンのフラグメントに結合するか、または前記フラグメントの１つ以上のアミノ酸を含むヒトフェロポーチンのエピトープに結合する、請求項３４の単離された抗体。
請求項36
アミノ酸ＡＮＩＶＰＥＴＳＰＥＳ（配列番号１６のアミノ酸４３９〜４４９）からなる前記ヒトフェロポーチンのフラグメントに結合するか、または前記フラグメントの１つ以上のアミノ酸を含むヒトフェロポーチンのエピトープに結合する、請求項１から３２のうちのいずれか一項の単離された抗体。
請求項37
請求項１から３２のうちのいずれか一項の単離された抗体であって、前記抗体は、アミノ酸ＩＶＰＥＴＳＰＥＳＶ（配列番号１６のアミノ酸４４１〜４５０）、アミノ酸ＮＩＶＰＥＴＳＰＥＳ（配列番号１６のアミノ酸４４０〜４４９）、アミノ酸ＶＰＥＴＳＰＳＶ（配列番号１６のアミノ酸４４２〜４５１）、アミノ酸ＰＥＴＳＰＥＳＶＰＩ（配列番号１６のアミノ酸４４３〜４５２）、アミノ酸ＴＳＰＥＳＶＰＩＩＳ（配列番号１６のアミノ酸４４５〜４５４）、アミノ酸ＡＮＩＶＰＥＴＳＰ（配列番号１６のアミノ酸４３９〜４４７）、アミノ酸ＩＶＰＥＴＳＰＥＳ（配列番号１６のアミノ酸４４１〜４４９）、アミノ酸ＡＮＩＶＰＥＴＳ（配列番号１６のアミノ酸４３９〜４４６）、アミノ酸ＩＶＰＥＴＳＰＥ（配列番号１６のアミノ酸４４１〜４４８）、アミノ酸ＩＶＰＥＴＳＰ（配列番号１６のアミノ酸４４１〜４４７）、およびアミノ酸ＰＥＴＳＰＥＳ（配列番号１６のアミノ酸４４３〜４４９）からなる群から選択される前記ヒトフェロポーチンのフラグメントに結合するか、または前記フラグメントの１つ以上のアミノ酸を含むヒトフェロポーチンのエピトープに結合する、抗体。
請求項38
請求項１から３２のうちのいずれか一項の単離された抗体であって、前記抗体は、アミノ酸ＬＶＥＬＹＧＮＳＬＬ（配列番号１６のアミノ酸５０〜６９）、アミノ酸ＦＬＶＥＬＹＧＮＳＬ（配列番号１６のアミノ酸４９〜６８）、アミノ酸ＶＥＬＹＧＮＳＬＬＬ（配列番号１６のアミノ酸５１〜７０）、アミノ酸ＥＬＹＧＮＳＬＬＬＴ（配列番号１６アミノ酸５２〜７１）、アミノ酸ＬＹＧＮＳＬＬＬＴＡ（配列番号１６のアミノ酸５３〜７２）、アミノ酸ＬＡＦＬＹＭＴＶＬＧ（配列番号１６のアミノ酸３１４〜３２３）、アミノ酸ＡＦＬＹＭＴＶＬＧＦ（配列番号１６のアミノ酸３１５〜３２４）、アミノ酸ＦＬＹＭＴＶＬＧＦＤ（配列番号１６のアミノ酸３１６〜３２５）、アミノ酸ＩＱＧＥＳＩＴＰＴＫＩＰＥＩＴ（配列番号１６のアミノ酸４１３〜４２７）、アミノ酸ＩＱＧＥＳＩＴＰＴＫ（配列番号１６のアミノ酸４１３〜４２２）、アミノ酸ＱＧＥＳＩＴＰＴＫＩ（配列番号１６のアミノ酸４１４〜４２３）、アミノ酸ＧＥＳＩＴＰＴＫＩＰ（配列番号１６のアミノ酸４１５〜４２４）、アミノ酸ＥＳＩＴＰＴＫＩＰＥ（配列番号１６のアミノ酸４１６〜４２５）、アミノ酸ＳＩＴＰＴＫＩＰＥＩ（配列番号１６のアミノ酸４１７〜４２６）、アミノ酸ＩＴＰＴＫＩＰＥＩＴ（配列番号１６のアミノ酸４１８〜４２７）、アミノ酸ＤＧＷＶＳＹＹＮＱＰ（配列番号１６のアミノ酸２９７〜３０６）、アミノ酸ＩＴＴＥＩＹＭＳＮＧＳＮＳ（配列番号１６のアミノ酸４２６〜４３８）、アミノ酸ＴＥＩＹＭＳＮＧＳＮＳＡ（配列番号１６のアミノ酸４２８〜４３９）、アミノ酸ＩＴＴＥＩＹＭＳＮＧ（配列番号１６のアミノ酸４２６〜４３５）、アミノ酸ＴＴＥＩＹＭＳＮＧＳ（配列番号１６のアミノ酸４２７〜４３６）、アミノ酸ＴＥＩＹＭＳＮＧＳＮ（配列番号１６のアミノ酸４２８〜４３７）、アミノ酸ＥＩＹＭＳＮＧＳＮＳ（配列番号１６のアミノ酸４２９〜４３８）、アミノ酸ＩＹＭＳＮＧＳＮＳＡ（配列番号１６のアミノ酸４３０〜４３９）、アミノ酸ＹＨＧＷＶＬＴＳＣＹ（配列番号１６のアミノ酸１２４〜１３３）、アミノ酸ＲＤＧＷＶＳＹＹＮＱ（配列番号１６のアミノ酸２９６〜３０５）、アミノ酸ＥＩＹＭＳＮＧ（配列番号１６のアミノ酸４２９〜４３５）、アミノ酸ＩＹＭＳＮＧＳＮ（配列番号１６のアミノ酸４３０〜４３７）、アミノ酸ＩＴＰＴＫ（配列番号１６のアミノ酸４１８〜４２２）、アミノ酸ＳＩＴＰＴＫＩＰＥＩ（配列番号１６のアミノ酸４１７〜４２６）およびアミノ酸ＥＩＹＭＳＮＧＳＮＳ（配列番号１６のアミノ酸４２９〜４３８）からなる群から選択される前記ヒトフェロポーチンのフラグメントに結合するか、または前記フラグメントの１つ以上のアミノ酸を含むヒトフェロポーチンのエピトープに結合する、抗体。
請求項39
キメラ化、ヒト化、または完全なヒト抗体である、請求項１から３８のうちのいずれか一項の単離された抗体。
請求項40
キメラ化抗体である、請求項３９の単離された抗体。
請求項41
ヒト化抗体である、請求項３９の単離された抗体。
請求項42
単鎖Ｆｖ抗体フラグメントである、請求項１から３８のうちのいずれか一項の単離されたモノクローナル抗体。
請求項43
Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）またはナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）である、請求項１から３８のうちのいずれか一項の単離されたモノクローナル抗体。
請求項44
完全なヒト抗体である、請求項３９の単離されたモノクローナル抗体。
請求項45
ヒトコンセンサス抗体配列、ヒト生殖細胞系抗体配列、またはヒト生殖細胞系コンセンサス抗体配列である、フレームワークアミノ酸配列を含む、請求項１から３８のうちのいずれか一項の単離されたモノクローナル抗体。
請求項46
ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤまたはＩｇＭアイソタイプのものである、請求項１から３８のうちのいずれか一項の単離されたモノクローナル抗体。
請求項47
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである、請求項１から３８のうちのいずれか一項の単離されたモノクローナル抗体。
請求項48
ＩｇＧ抗体である、請求項１から３８のうちのいずれか一項の単離されたモノクローナル抗体。
請求項49
２本の重鎖および２本の軽鎖を含む、請求項４８の単離されたモノクローナル抗体。
請求項50
請求項１から３８のうちのいずれか一項の抗体をコードする核酸。
請求項51
請求項５０の核酸を含むベクター。
請求項52
請求項５１のベクターまたは請求項５０の核酸を含む宿主細胞。
請求項53
請求項１から３８のうちのいずれか一項の抗体を産生する方法であって、（ａ）哺乳動物に、フェロポーチン（配列番号１６）をコードする核酸を投与するステップ、任意に（ｂ）前記哺乳動物に、フェロポーチン（配列番号１６）をコードする同一または異なる核酸を投与するステップ、任意に（ｃ）前記哺乳動物に、フェロポーチンを発現する細胞膜を含む組成物を投与するステップ、および（ｄ）前記哺乳動物から、抗体を発現する細胞を獲得するステップを含む、方法。
請求項54
核酸を発現させて、抗体を産生するように、請求項Ｆ１３の宿主細胞を培養するステップを含む、請求項１から３８のうちのいずれか一項の抗体を産生する方法。
請求項55
宿主細胞培養物から抗体を回収するステップをさらに含む、請求項５４の方法。
請求項56
請求項１から３８のうちのいずれか一項の抗体、および薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物。
請求項57
試料において、フェロポーチンの存在を検出するための方法であって、請求項１から３８のうちのいずれか一項のモノクローナル抗体のうちの少なくとも１つとともに、フェロポーチンに前記モノクローナル抗体を結合させることが可能な条件下で、前記試料を温置するステップ、および前記結合モノクローナル抗体または前記結合フェロポーチンを検出するステップを含む、方法。
請求項58
モノクローナル抗体は、抗体３１Ａ５と同一のエピトープに結合する、または、フェロポーチンへの結合に対して、約７５％、抗体３１Ａ５と競合する、請求項５７の方法。
請求項59
モノクローナル抗体は、抗体３７Ａ２と同一のエピトープに結合する、または、フェロポーチンへの結合に対して、約７５％、抗体３７Ａ２と競合する、請求項５７の方法。
請求項60
モノクローナル抗体は、抗体３７Ｂ９と同一のエピトープに結合する、または、フェロポーチンへの結合に対して、約７５％、抗体３７Ｂ９と競合する、請求項５７の方法。
請求項61
モノクローナル抗体は、抗体３７Ｃ８と同一のエピトープに結合する、または、フェロポーチンへの結合に対して、約７５％、抗体３７Ｃ８と競合する、請求項５７の方法。
請求項62
モノクローナル抗体は、抗体３７Ｇ８と同一のエピトープに結合する、または、フェロポーチンへの結合に対して、約７５％、抗体３７Ｇ８と競合する、請求項５７の方法。
請求項63
モノクローナル抗体は、抗体３８Ａ４と同一のエピトープに結合する、または、フェロポーチンへの結合に対して、約７５％、抗体３８Ａ４と競合する、請求項５７の方法。
請求項64
モノクローナル抗体は、抗体３８Ｃ８と同一のエピトープに結合する、または、フェロポーチンへの結合に対して、約７５％、抗体３８Ｃ８と競合する、請求項５７の方法。
請求項65
モノクローナル抗体は、抗体３８Ｄ２と同一のエピトープに結合する、または、フェロポーチンへの結合に対して、約７５％、抗体３８Ｄ２と競合する、請求項５７の方法。
請求項66
モノクローナル抗体は、抗体３８Ｅ３と同一のエピトープに結合する、または、フェロポーチンへの結合に対して、約７５％、抗体３８Ｅ３と競合する、請求項５７の方法。
請求項67
モノクローナル抗体は、抗体３８Ｇ６と同一のエピトープに結合する、または、フェロポーチンへの結合に対して、約７５％、抗体３８Ｇ６と競合する、請求項５７の方法。
請求項68
フェロポーチンに結合するポリクローナル抗体とともに、試料を温置するステップをさらに含む、請求項５７の方法。
請求項69
モノクローナル抗体は、固体支持体上に固定化される、請求項６８の方法。
請求項70
ポリクローナル抗体は、標識化される、請求項６８の方法。
請求項71
ポリクローナル抗体は、固体支持体上に固定化される、請求項６８の方法。
請求項72
モノクローナル抗体は、標識化される、請求項６９の方法。
請求項73
抗体は、固体支持体上に固定化され、ならびに請求項１から３６のうちのいずれか一項の第２の抗体と、フェロポーチンを接触させるステップをさらに含む、請求項５７の方法。
請求項74
生体試料は、ヒトから単離される、請求項５７の方法。
請求項75
生体試料は、組織、および血球からなる群から選択される、請求項７４の方法。
請求項76
第２の抗体は、固体支持体上に固定化される抗体によって認識されるものとは異なるエピトープを認識する、請求項７３の方法。
請求項77
第２の抗体は、標識化される、請求項７３の方法。
請求項78
抗体とともに、既知量の精製されたフェロポーチン標準物質を温置するステップを含む、請求項７３の方法。
請求項79
鉄ホメオスタシスの障害に罹患する対象を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１から３８のうちのいずれか一項の抗体を投与するステップを含む、方法。
請求項80
鉄ホメオスタシスの障害は、貧血、敗血症、炎症性貧血、癌性貧血、化学療法誘導貧血、慢性炎症性貧血、うっ血性心不全、末期腎疾患、慢性腎臓病（ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶ）、鉄欠乏性貧血、フェロポーチン病、ヘモクロマトーシス、糖尿病、炎症、関節リウマチ、動脈硬化症、腫瘍、血管炎、全身性エリテマトーデス、異常血色素症、および赤血球障害からなる群から選択される、請求項７９の方法。
請求項81
前記対象に、赤血球生成刺激剤を投与するステップをさらに含む、請求項７９の方法。
請求項82
赤血球生成刺激剤は、エリスロポエチン、エリスロポエチンの変異体およびエリスロポエチンに結合する抗体からなる群から選択される、請求項８１の方法。
請求項83
治療を必要とする対象に対して治療レジメンを選択する方法であって、（ａ）血中鉄レベルの減少に対して対象をスクリーニングするステップ、（ｂ）前記対象に、請求項１から３６のいずれかの抗体を処方するステップを含む、方法。
請求項84
スクリーニングには、生体試料を獲得するステップおよび前記試料において、鉄濃度を決定するステップを含む、請求項８３の方法。
請求項85
前記対象に、赤血球生成刺激剤を処方するステップをさらに含む、請求項８３の方法。
請求項86
前記対象に、鉄を処方するステップをさらに含む、請求項８３の方法。
請求項87
鉄ホメオスタシスの障害の治療のための併用療法であって、治療を必要とする対象に、請求項１から３８のうちのいずれか一項の抗体および赤血球生成刺激剤を治療有効量で投与するステップを含む、併用療法。
請求項88
抗体および赤血球生成刺激剤は、１つの組成物に製剤化される、請求項８７の併用療法。
請求項89
抗体および赤血球生成刺激剤は、別個の組成物に製剤化される、請求項８７の併用療法。
請求項90
鉄ホメオスタシスの障害の治療のための併用療法であって、それを必要とする対象に、請求項１から３８のうちのいずれか一項の抗体および抗ヘプシジン抗体を治療有効量で投与するステップを含む、併用療法。
請求項91
抗体および抗ヘプシジン抗体は、１つの組成物に製剤化される、請求項９０の併用療法。
請求項92
抗体および抗ヘプシジン抗体は、別個の組成物に製剤化される、請求項９０の併用療法。
請求項93
エリスロポエチン刺激剤による療法に対して低応答性である対象を治療する方法であって、前記対象に、請求項１から３８のうちのいずれか一項の抗体を投与するステップを含む、方法。
請求項94
前記対象に、赤血球生成刺激剤を投与するステップをさらに含む、請求項９３の方法。
請求項95
対象は、貧血、敗血症、炎症性貧血、癌性貧血、化学療法誘導貧血、慢性炎症性貧血、うっ血性心不全、末期腎疾患、慢性腎臓病（ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶ）、鉄欠乏性貧血、フェロポーチン病、ヘモクロマトーシス、糖尿病、炎症、関節リウマチ、動脈硬化症、腫瘍、血管炎、全身性エリテマトーデス、異常血色素症、赤血球障害および腎不全からなる群から選択される病態に罹患している、請求項９３の方法。
請求項96
対象は、貧血に罹患している、請求項９３の方法。
請求項97
対象は、ヒトである、請求項９３の方法。
請求項98
赤血球生成刺激剤は、配列番号２１のヒトエリスロポエチンである、請求項９４の方法。
請求項99
赤血球生成刺激剤は、配列番号２２のダルベポエチンアルファである、請求項９４の方法。
請求項100
対象を静脈切開するステップをさらに含む、請求項９４の方法。
請求項101
鉄過剰の治療のための併用療法であって、治療を必要とする対象に、請求項１から３８のうちのいずれか一項の抗体および鉄キレート剤を治療有効量で投与するステップを含む、併用療法。